猪嵴病毒WUH1株全基因组序列分析及病毒的分离
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-19页 |
| ·微小RNA病毒的研究进展 | 第12-13页 |
| ·微小RNA病毒的病原学 | 第12页 |
| ·微小RNA病毒的生物学特性 | 第12-13页 |
| ·嵴病毒的研究进展 | 第13-17页 |
| ·嵴病毒的病原学 | 第13-14页 |
| ·嵴病毒的临床症状与致病机制 | 第14页 |
| ·嵴病毒的基因组结构和功能 | 第14-16页 |
| ·基因组编码的蛋白及其作用 | 第16页 |
| ·嵴病毒的遗传进化研究 | 第16页 |
| ·猪嵴病毒的流行病学研究 | 第16-17页 |
| ·RACE技术 | 第17-18页 |
| ·病毒的分离 | 第18-19页 |
| 第二章 研究目的与意义 | 第19-20页 |
| 第三章 材料与方法 | 第20-31页 |
| ·实验材料 | 第20-22页 |
| ·实验样品 | 第20页 |
| ·菌株与细胞 | 第20页 |
| ·载体与质粒 | 第20-21页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第21页 |
| ·培养基与抗生素及其配制 | 第21-22页 |
| ·主要缓冲液与相关试剂及其配制 | 第22页 |
| ·感受态细胞制备用试剂 | 第22页 |
| ·分子生物学分析软件 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-31页 |
| ·样品处理 | 第22页 |
| ·组织样品、接种病毒的细胞样品总RNA的提取 | 第22-23页 |
| ·反转录 | 第23页 |
| ·PCR检测方法的建立 | 第23-24页 |
| ·猪嵴病毒病毒基因组序列的PCR扩增 | 第24-27页 |
| ·限制性内切酶酶切反应 | 第27页 |
| ·PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第27页 |
| ·PCR产物或酶切产物回收与纯化 | 第27-28页 |
| ·外源DNA片段与质粒载体的连接反应 | 第28页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第28页 |
| ·连接产物的转化 | 第28-29页 |
| ·质粒的制备与鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的测序 | 第30页 |
| ·病毒的增殖 | 第30-31页 |
| 第四章 结果与分析 | 第31-46页 |
| ·猪嵴病毒检测方法的建立 | 第31-33页 |
| ·PKV引物设计 | 第31页 |
| ·退火温度的选择 | 第31页 |
| ·特异性实验结果 | 第31-32页 |
| ·敏感性实验结果 | 第32-33页 |
| ·临床样品中PKV检测结果 | 第33页 |
| ·PKV扩增产物序列测定和比较分析 | 第33页 |
| ·猪嵴病毒基因组遗传进化分析 | 第33-37页 |
| ·PKV基因组各片段的扩增 | 第33-35页 |
| ·PKV基因组各个片段重组质粒的酶切鉴定结果 | 第35-37页 |
| ·各阳性克隆的测序及拼接结果 | 第37页 |
| ·基因遗传进化分析结果 | 第37-39页 |
| ·PKV与其他微小RNA病毒的对比分析 | 第37-38页 |
| ·PKV基因组进化树分析 | 第38-39页 |
| ·基因组序列分析结果 | 第39-42页 |
| ·PKV的核苷酸序列分析 | 第39-40页 |
| ·PKV蛋白的序列分析 | 第40-42页 |
| ·猪嵴病毒分离鉴定结果 | 第42-46页 |
| ·PKV的分离 | 第42-46页 |
| 第五章 讨论与结论 | 第46-48页 |
| ·猪嵴病毒的检测方法和流行病学调查 | 第46页 |
| ·PKV病毒基因组的扩增 | 第46-47页 |
| ·PKV的基因组分析 | 第47页 |
| ·PKV的分离 | 第47页 |
| ·结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 附录 | 第54页 |
