| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-26页 |
| 1 植物免疫系统 | 第14-18页 |
| ·植物先天免疫系统 | 第15-17页 |
| ·病原相关分子引发的先天免疫 | 第15-17页 |
| ·效应子引发的免疫反应 | 第17页 |
| ·植物后天免疫系统 | 第17-18页 |
| ·系统获得抗性 | 第17-18页 |
| ·诱导系统抗性 | 第18页 |
| 2 泛素/26S 蛋白酶体系统及其功能 | 第18-24页 |
| ·泛素化过程 | 第19页 |
| ·不同类型的泛素连接酶 | 第19-20页 |
| ·26S 蛋白酶体 | 第20页 |
| ·泛素/蛋白酶体途径在植物防御反应中的作用 | 第20-24页 |
| ·泛素化在植物防御中的作用 | 第21-22页 |
| ·泛素连接酶介导植物防御信号 | 第22-23页 |
| ·与植物防御相关的 26S 蛋白酶体 | 第23-24页 |
| 3 本文研究的目的与意义 | 第24-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-51页 |
| 1 试验材料 | 第26-32页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·质粒载体与菌株 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·引物 | 第27-31页 |
| ·培养基与试剂配制 | 第31-32页 |
| 2 试验方法 | 第32-51页 |
| ·生物信息学分析 | 第32-33页 |
| ·基因定位与基因结构分析 | 第32页 |
| ·保守结构域分析 | 第32-33页 |
| ·多序列比对与进化树分析 | 第33页 |
| ·载体构建 | 第33-36页 |
| ·原核表达载体构建 | 第33页 |
| ·亚细胞定位载体构建 | 第33页 |
| ·植物瞬时表达载体构建 | 第33-35页 |
| ·植物过量稳定表达载体构建 | 第35页 |
| ·植物干扰表达载体构建 | 第35-36页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第36-38页 |
| ·农杆菌介导的转化 | 第36-37页 |
| ·农杆菌介导的葡萄叶片瞬时转化 | 第37页 |
| ·农杆菌介导的拟南芥转化 | 第37-38页 |
| ·病原菌接种与病情调查 | 第38页 |
| ·核酸分子操作方法 | 第38-40页 |
| ·葡萄叶片总 RNA 的提取 | 第38-39页 |
| ·葡萄叶片基因组 DNA 的提取 | 第39页 |
| ·普通反转录与 RACE 反转录 | 第39-40页 |
| ·RACE-PCR 与 RT-PCR | 第40页 |
| ·实时荧光定量 PCR（qRT-PCR） | 第40页 |
| ·蛋白操作方法 | 第40-41页 |
| ·原核表达蛋白与纯化 | 第40-41页 |
| ·葡萄叶片蛋白提取 | 第41页 |
| ·Western 杂交 | 第41页 |
| ·酵母双杂交试验 | 第41-46页 |
| ·中国野生华东葡萄白河 35-1 酵母表达 cDNA 文库构建 | 第41-44页 |
| ·诱饵载体的构建与鉴定 | 第44页 |
| ·Mating 筛选互作蛋白 | 第44-46页 |
| ·候选基因回复杂交验证 | 第46页 |
| ·亚细胞定位试验 | 第46-48页 |
| ·洋葱表皮亚细胞定位试验 | 第46-47页 |
| ·拟南芥原生质体亚细胞定位试验 | 第47-48页 |
| ·转录因子转录激活分析 | 第48页 |
| ·离体酵母体内激活分析 | 第48页 |
| ·植物体内激活分析 | 第48页 |
| ·双分子荧光互补（BiFC）试验 | 第48-49页 |
| ·BiFC 载体构建 | 第48-49页 |
| ·BiFC 试验 | 第49页 |
| ·蛋白质体内降解试验 | 第49页 |
| ·启动子活性检测试验 | 第49-51页 |
| ·GUS 组织染色分析 | 第49页 |
| ·GUS 定量分析 | 第49-51页 |
| 第三章 结果与分析 | 第51-90页 |
| 1 中国野生华东葡萄泛素连接酶基因 UIRP1 的克隆与序列分析 | 第51-54页 |
| ·中国野生华东葡萄泛素连接酶基因 UIRP1 的克隆 | 第51-52页 |
| ·中国野生华东葡萄泛素连接酶基因 UIRP1 序列分析 | 第52-54页 |
| 2 中国野生华东葡萄泛素连接酶基因 UIRP1 对病原菌的响应 | 第54-55页 |
| 3 中国野生华东葡萄泛素连接酶基因 UIRP1 的原核表达与酶活性分析 | 第55-59页 |
| ·中国野生华东葡萄泛素连接酶基因 UIRP1 的原核表达 | 第55-57页 |
| ·中国野生华东葡萄泛素连接酶基因 UIRP1 的酶活性分析 | 第57-59页 |
| 4 中国野生华东葡萄泛素连接酶基因 UIRP1 的亚细胞定位分析 | 第59-61页 |
| 5 中国野生华东葡萄泛素连接酶基因 UIRP1 启动子的克隆与功能分析 | 第61-65页 |
| ·中国野生华东葡萄泛素连接酶基因 UIRP1 启动子的克隆与序列分析 | 第61-62页 |
| ·中国野生华东葡萄泛素连接酶基因 UIRP1 启动子功能分析 | 第62-65页 |
| 6 中国野生华东葡萄泛素连接酶基因 UIRP1 互作蛋白的筛选 | 第65-70页 |
| ·诱饵表达载体的构建、毒性检测与自激活分析 | 第65-67页 |
| ·病原菌诱导的酵母表达 cDNA 文库构建 | 第67-68页 |
| ·Mating 筛选中国野生华东葡萄泛素连接酶基因 UIRP1 的互作蛋白 | 第68-70页 |
| 7 BiFC 验证中国野生华东葡萄泛素连接酶基因与转录因子基因 VpWRKY11 的相互作用 | 第70-72页 |
| 8 中国野生华东葡萄泛素连接酶基因 UIRP1 的互作蛋白转录因子基因 VpWRKY11的功能分析 | 第72-77页 |
| ·中国野生华东葡萄 VpWRKY11 的序列分析 | 第72页 |
| ·中国野生华东葡萄转录因子基因 VpWRKY11 的亚细胞定位分析 | 第72-74页 |
| ·中国野生华东葡萄转录因子基因 VpWRKY11 的转录激活分析 | 第74-76页 |
| ·中国野生华东葡萄转录因子基因 VpWRKY11 对病原菌的响应 | 第76-77页 |
| 9 中国野生华东葡萄泛素连接酶基因 UIRP1 与互作蛋白转录因子基因 VpWRKY11的相互作用模式分析 | 第77-83页 |
| ·中国野生华东葡萄泛素连接酶基因 UIRP1 作用在转录因子基因 VpWRKY11的上游 | 第77-81页 |
| ·中国野生华东葡萄泛素连接酶基因 UIRP1 在体内降解 VpWRKY11 | 第81-83页 |
| 10 中国野生华东葡萄泛素连接酶基因 UIRP1 在拟南芥中过量表达分析 | 第83-90页 |
| ·转中国野生华东葡萄泛素连接酶基因拟南芥的鉴定与表型分析 | 第83-85页 |
| ·转中国野生华东葡萄泛素连接酶基因拟南芥的抗病性鉴定 | 第85-87页 |
| ·转中国野生华东葡萄泛素连接酶基因拟南芥增强对病原真菌的抗性 | 第85-86页 |
| ·转中国野生华东葡萄泛素连接酶基因拟南芥增强对丁香假单胞菌的抗性 | 第86-87页 |
| ·转中国野生华东葡萄泛素连接酶基因拟南芥中抗病相关基因的表达分析 | 第87-90页 |
| 第四章 讨论 | 第90-98页 |
| 1 关于泛素连接酶基因研究 | 第90-91页 |
| 2 关于泛素连接酶基因 UIRP1 参与植物抗病反应 | 第91-92页 |
| 3 关于泛素连接酶基因 UIRP1 与有关转录因子基因的相互作用 | 第92页 |
| 4 关于转录因子基因参与抗病的反应方式 | 第92-94页 |
| 5 关于中国野生华东葡萄泛素连接酶基因 UIRP1 作用底物 | 第94-96页 |
| 6 关于中国野生华东葡萄泛素连接酶基因 UIRP1 泛素化转录因子基因 VpWRKY11的调控葡萄的抗病性 | 第96-98页 |
| 第五章 结论 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-105页 |
| 致谢 | 第105-106页 |
| 作者简介 | 第106页 |
