| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-18页 |
| 一、动物疥螨病的研究进展 | 第10-16页 |
| 1 生物学 | 第10页 |
| 2 免疫学 | 第10-14页 |
| ·抗原 | 第10-11页 |
| ·疥螨引起的免疫应答机制 | 第11-14页 |
| ·特异性体液免疫 | 第11-12页 |
| ·IgG和IgM | 第11-12页 |
| ·IgE | 第12页 |
| ·IgA | 第12页 |
| ·特异性皮肤免疫 | 第12-13页 |
| ·特异性细胞免疫 | 第13-14页 |
| ·先天性免疫反应 | 第14页 |
| 3 诊断 | 第14-15页 |
| ·病原诊断 | 第14-15页 |
| ·免疫学诊断 | 第15页 |
| ·血凝抑制实验 | 第15页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第15页 |
| ·聚合酶链反应(PCR)诊断 | 第15页 |
| 4 治疗 | 第15-16页 |
| 5 展望 | 第16页 |
| 二、选题的目的意义 | 第16-18页 |
| 第二章 疥螨硫氧还蛋白过氧化物酶基因的克隆表达、免疫组化及重组抗原Dot-ELISA检测方法的建立 | 第18-46页 |
| 摘要 | 第18页 |
| 引言 | 第18-19页 |
| 1 材料与方法 | 第19-34页 |
| ·试验材料 | 第19-21页 |
| ·试验样品 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19页 |
| ·菌株及质粒载体 | 第19页 |
| ·主要仪器设备 | 第19页 |
| ·主要溶液的配制 | 第19-21页 |
| ·主要生物信息数据库和计算机软件 | 第21页 |
| ·试验方法 | 第21-34页 |
| ·兔疥螨的采集 | 第21页 |
| ·疥螨硫氧还蛋白过氧化物酶(SsTPx)基因的克隆 | 第21-25页 |
| ·疥螨总RNA的提取 | 第21-22页 |
| ·引物设计及合成 | 第22页 |
| ·SsTPx基因的RT-PCR扩增 | 第22-23页 |
| ·PCR产物的回收 | 第23-24页 |
| ·目的基因的连接和转化 | 第24页 |
| ·转化菌落的PCR鉴定 | 第24-25页 |
| ·目的基因序列测序 | 第25页 |
| ·SsTPx基因的原核表达载体构建 | 第25-27页 |
| ·表达引物设计 | 第25页 |
| ·SsTPx基因旳亚克隆 | 第25页 |
| ·SsTPx基因的T/A克隆质粒的构建 | 第25页 |
| ·SsTPx基因TA克隆质粒的提取和酶切 | 第25-27页 |
| ·pET-32a(+)质粒的提取与酶切 | 第27页 |
| ·酶切后的SsTPx基因质粒与pET32a(+)质粒的T4连接与转化 | 第27页 |
| ·重组表达质粒鉴定 | 第27页 |
| ·重组表达质粒pET32a(+)-SsTPx在大肠杆菌中的诱导表达 | 第27-31页 |
| ·重组表达质粒pET32a(+)-SsTPx的转化 | 第27-28页 |
| ·IPTG诱导表达 | 第28-29页 |
| ·诱导表达的条件优化 | 第29页 |
| ·表达蛋白的可溶性分析 | 第29-30页 |
| ·纯化表达蛋白 | 第30页 |
| ·重组表达pET32a(+)-SsTPx产物免疫印迹 | 第30-31页 |
| ·特异性抗SsTPx兔血清的制备 | 第31-32页 |
| ·蛋白乳剂苗制备 | 第31页 |
| ·免疫程序 | 第31页 |
| ·间接ELISA检测高免血清效价 | 第31-32页 |
| ·纯化特异性SsTPx-IgG | 第32页 |
| ·免疫组织化学 | 第32-33页 |
| ·斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA) | 第33-34页 |
| 2 试验结果 | 第34-43页 |
| ·疥螨SsTPx基因的克隆 | 第34-38页 |
| ·疥螨SsTPx基因的克隆以及基因序列分析 | 第34-35页 |
| ·疥螨SsTPx的蛋白质生物信息学分析 | 第35-38页 |
| ·SsTPx氨基酸组分序列分析 | 第35-36页 |
| ·氨基酸序列比对分析 | 第36页 |
| ·SsTPx信号肽位点预测以及跨膜区预测分析 | 第36-38页 |
| ·SsTPx蛋白质二级结构β螺旋结构分析以及三级结构预测 | 第38页 |
| ·疥螨SsTPx基因的表达 | 第38-39页 |
| ·重组表达质粒pET32a(+)-SsTPx表达条件的优化 | 第39-40页 |
| ·IPTG浓度的优化 | 第39页 |
| ·表达诱导时间的优化 | 第39-40页 |
| ·重组SsTPx蛋白的纯化 | 第40页 |
| ·重组SsTPx蛋白的免疫印迹结果 | 第40页 |
| ·重组SsTPx蛋白的蛋白分布情况 | 第40-41页 |
| ·斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA) | 第41-43页 |
| ·敏感性、特异性以及交叉反应性分析 | 第41-42页 |
| ·观察者之间Kappa值分析 | 第42-43页 |
| 3 讨论 | 第43-46页 |
| ·疥螨硫氧还蛋白过氧化物酶基本特征分析 | 第43-44页 |
| ·SsTPx诊断价值分析 | 第44页 |
| ·SsTPx交叉反应性分析 | 第44页 |
| ·Dot-ELISA诊断方法敏感性及特异性分析 | 第44-46页 |
| 第三章 疥螨肌钙蛋白C基因的克隆以及序列分析 | 第46-56页 |
| 摘要 | 第46页 |
| 引言 | 第46-47页 |
| 1 材料与方法 | 第47-49页 |
| ·试验材料 | 第47-48页 |
| ·试验样品 | 第47页 |
| ·主要试剂 | 第47页 |
| ·菌株及质粒载体 | 第47页 |
| ·主要仪器设备 | 第47页 |
| ·主要溶液的配制 | 第47-48页 |
| ·主要生物信息数据库和计算机软件 | 第48页 |
| ·试验方法 | 第48-49页 |
| ·兔疥螨的采集 | 第48页 |
| ·疥螨肌钙蛋白C基因(SsTnC)的克隆 | 第48-49页 |
| ·疥螨总RNA的提取 | 第48页 |
| ·引物设计及合成 | 第48页 |
| ·SsTnC基因的RT-PCR扩增 | 第48页 |
| ·PCR产物的回收 | 第48页 |
| ·目的基因的连接和转化 | 第48-49页 |
| ·转化菌落的PCR鉴定 | 第49页 |
| ·目的基因序列测序 | 第49页 |
| 2 试验结果 | 第49-54页 |
| ·疥螨SsTnC基因的克隆以及基因序列分析 | 第49-50页 |
| ·疥螨SsTnC基因蛋白质生物信息学分析 | 第50-54页 |
| ·一级结构预测分析 | 第50-52页 |
| ·二级结构预测分析 | 第52-54页 |
| ·蛋白质三级结构预测分析 | 第54页 |
| 3 讨论 | 第54-56页 |
| ·疥螨肌钙蛋白C基因基本特征分析 | 第54-55页 |
| ·SsTnC免疫诊断价值预测分析 | 第55-56页 |
| 第四章 结论和创新点 | 第56-57页 |
| 1. 结论 | 第56页 |
| 2. 创新点 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第67-68页 |
