| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-11页 |
| 1 前言 | 第11-25页 |
| ·生物抗氧化胁迫的背景介绍 | 第11-12页 |
| ·生物体内的活性氧 | 第11页 |
| ·生物体内抗氧化胁迫的机制 | 第11-12页 |
| ·谷胱甘肽过氧化物酶的研究进展 | 第12-23页 |
| ·动物谷胱甘肽过氧化物酶 | 第12-15页 |
| ·动物GPX的发现与分类 | 第13-14页 |
| ·动物GPX的结构 | 第14-15页 |
| ·植物谷胱甘肽过氧化物酶 | 第15-19页 |
| ·植物GPX的克隆研究 | 第15页 |
| ·植物GPX的表达特异性与抗性研究 | 第15-16页 |
| ·植物GPX催化性质的研究 | 第16-19页 |
| ·植物GPX亚细胞定位的研究 | 第19页 |
| ·谷胱甘肽过氧化物酶的进化模式研究 | 第19-23页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第23-25页 |
| 2 水稻OsGPX3和OsGPX4基因的克隆及序列和蛋白结构分析 | 第25-45页 |
| ·材料 | 第25页 |
| ·实验材料 | 第25页 |
| ·工具酶与试剂 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-33页 |
| ·水稻OsGPX3和OsGPX4序列的扩增 | 第25-30页 |
| ·水稻GPX基因序列的鉴定与命名 | 第25页 |
| ·克隆引物的设计 | 第25-26页 |
| ·总RNA提取 | 第26-27页 |
| ·DNase Ⅰ处理RNA样品 | 第27页 |
| ·反转录合成cDNA | 第27-28页 |
| ·PCR扩增OsGPX3和OsGPX4基因 | 第28-29页 |
| ·PCR产物胶同收与纯化 | 第29页 |
| ·加A反应及反应产物液体纯化 | 第29-30页 |
| ·水稻OsGPX3和OsGPX4克隆载体的构建 | 第30-32页 |
| ·连接 | 第30-31页 |
| ·感受态细胞JM109的制备 | 第31页 |
| ·转化 | 第31-32页 |
| ·菌落PCR检测及测序验证 | 第32页 |
| ·水稻OsGPX3和OsGPX4基因的序列和蛋白结构分析 | 第32-33页 |
| ·基因结构分析 | 第32页 |
| ·系统发生关系分析 | 第32-33页 |
| ·蛋白质的保守结构域分析 | 第33页 |
| ·蛋白质三维结构模拟 | 第33页 |
| ·结果与分析 | 第33-42页 |
| ·总RNA的提取 | 第33-34页 |
| ·PCR扩增OsGPX3和OsGOX4基因 | 第34页 |
| ·克隆载体的鉴定与测序结果 | 第34-37页 |
| ·水稻OsGPX3和OsGPX4的基因结构分析 | 第37页 |
| ·水稻OsGPX3和OsGPX4蛋白序列与系统发生关系分析 | 第37-40页 |
| ·水稻OsGPX3和OsGPX4蛋白质保守结构域的分析 | 第40-41页 |
| ·水稻OsGPX3和OsGPX4的蛋白质三维结构模拟 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-45页 |
| 3 水稻OsGPX3和OsGPX4基因的表达谱研究 | 第45-49页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·实验材料 | 第45页 |
| ·工具酶与试剂 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-46页 |
| ·PCR引物设计 | 第45页 |
| ·不同部位总RNA提取 | 第45页 |
| ·DNaseⅠ处理总RNA样品 | 第45页 |
| ·反转录合成cDNA | 第45-46页 |
| ·PCR反应 | 第46页 |
| ·结果与分析 | 第46-48页 |
| ·不同部位总RNA的提取 | 第46-47页 |
| ·OsGPX3和OsGPX4基因的表达谱 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| 4 水稻OsGPX3和OsGPX4蛋白表达、纯化及酶活性分析 | 第49-63页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·实验材料 | 第49页 |
| ·工具酶与试剂 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-56页 |
| ·目的序列的获得 | 第49-51页 |
| ·表达引物的设计 | 第49页 |
| ·PCR扩增目的序列 | 第49-50页 |
| ·目的序列的回收与纯化 | 第50页 |
| ·目的序列与pGEM-T载体连接 | 第50页 |
| ·转化及菌落PCR检测 | 第50-51页 |
| ·水稻OsGPX3和OsGPX4基因表达载体的构建 | 第51-53页 |
| ·质粒提取 | 第51页 |
| ·质粒双酶切 | 第51-52页 |
| ·双酶切产物与pET30a载体连接 | 第52-53页 |
| ·转化、菌落PCR检测及测序验证 | 第53页 |
| ·水稻OsGPX3和OsGPX4融合蛋白的表达与纯化 | 第53-55页 |
| ·水稻OsGPX3和OsGPX4蛋白的酶活性测定 | 第55-56页 |
| ·结果与分析 | 第56-61页 |
| ·PCR扩增目的序列 | 第56-57页 |
| ·菌落PCR结果 | 第57页 |
| ·质粒提取和双酶切结果 | 第57-58页 |
| ·表达载体的构建 | 第58-59页 |
| ·蛋白表达与纯化结果 | 第59-61页 |
| ·水稻OsGPX3和OsGPX4酶活性测定结果 | 第61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| 5 总结 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 个人简介 | 第71-72页 |
| 导师简介 | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 缩略语表 | 第75页 |
