| 中文摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 第一部分 CD133对结直肠癌侵袭能力的作用研究及机制探讨 | 第13-56页 |
| 引言 | 第14-17页 |
| 实验材料 | 第17-22页 |
| 实验方法 | 第22-36页 |
| 1. 细胞培养 | 第22页 |
| 2. 细胞总蛋白的提取 | 第22页 |
| 3. BCA法检测蛋白浓度 | 第22-23页 |
| 4. Real Time PCR | 第23-26页 |
| 5. Western Blotting | 第26-27页 |
| 6. 细胞CD133~+率分析及CD133~(high)、CD133~(low)分选 | 第27-28页 |
| 7. MTT法检测细胞增殖 | 第28页 |
| 8. 细胞集落形成率测定 | 第28页 |
| 9. Transwell体外侵袭实验 | 第28-29页 |
| 10. siRNA干扰CD133或TIMP2的表达 | 第29-30页 |
| 11. MMP2明胶酶谱检测 | 第30-31页 |
| 12. 质粒转化、扩增 | 第31页 |
| 13. CD133 shRNA表达载体构建 | 第31-34页 |
| 14. 慢病毒包装 | 第34页 |
| 15. 慢病毒感染目的细胞及稳定细胞株筛选 | 第34-35页 |
| 16. 统计学方法 | 第35-36页 |
| 实验结果 | 第36-50页 |
| 1. CD133在六种结直肠癌细胞系中的表达 | 第36-37页 |
| ·流式细胞术检测CD133在六种结肠癌细胞系中的表达情况 | 第36页 |
| ·Western blotting检测CD133在六种结肠癌细胞系中的表达情况 | 第36-37页 |
| 2. CD133~(high)亚群比CD133~(low)亚群具有更高的体外增殖能力与侵袭能力 | 第37-39页 |
| ·流式细胞术分选CD133~(high)与CD133~(low)细胞并检测分选纯度 | 第37页 |
| ·CD133~(high)亚群比CD133~(low)亚群具有更高的体外增殖能力 | 第37-38页 |
| ·CD133~(high)亚群比CD133~(low)亚群具有更强的集落形成能力 | 第38页 |
| ·CD133~(high)比CD133~(low)亚群具有更强的体外侵袭能力 | 第38-39页 |
| 3. siRNA下调CD133后降低了HCT116细胞的侵袭能力 | 第39-41页 |
| ·siRNA可有效下调HCT116细胞中CD133的表达 | 第39-40页 |
| ·siRNA下调CD133后对HCT116细胞增殖能力没有影响 | 第40-41页 |
| ·siRNA下调CD133后降低了HCT116细胞的体外侵袭能力 | 第41页 |
| 4. CD133的下调影响TIMP-2的表达 | 第41-44页 |
| ·侵袭转移相关信号通路分子筛查 | 第41-42页 |
| ·敲低CD133可使TIMP-2表达明显降低 | 第42-43页 |
| ·TIMP-2在CD133~(high)及CD133~(low)HCT116细胞中的表达没有区别 | 第43页 |
| ·敲低CD133对MMP及TIMP家族其他成员的影响 | 第43-44页 |
| 5. siRNA下调TIMP-2后对CD133表达无影响且可以降低细胞的体外侵袭能力 | 第44-47页 |
| ·siRNA可以有效下调TIMP-2的表达 | 第44-45页 |
| ·siRNA下调TIMP-2后对CD133表达没有影响 | 第45-46页 |
| ·siRNA下调TIMP-2后对细胞的体外增殖能力没有影响 | 第46页 |
| ·siRNA下调TIMP-2后可降低细胞的体外侵袭能力 | 第46-47页 |
| 6. MMP2及MEK/ERK通路不参与CD133及TIMP-2对细胞的影响 | 第47-48页 |
| 7. CD133 shRNA表达载体的构建及CD133稳定敲低细胞系的建立 | 第48-50页 |
| 讨论 | 第50-55页 |
| 小结 | 第55-56页 |
| 第二部分：ALDH对肿瘤细胞生物学特性的作用研究 | 第56-90页 |
| 引言 | 第57-59页 |
| 实验材料 | 第59-63页 |
| 实验方法 | 第63-72页 |
| 1. 细胞培养 | 第63页 |
| 2. 细胞总蛋白的提取 | 第63页 |
| 3. BCA法检测蛋白浓度 | 第63-64页 |
| 4. Real Time PCR | 第64-66页 |
| 5. Western Blotting | 第66-67页 |
| 6. 细胞ALDH~+率分析及ALDH~(high)、ALDH~(low)分选 | 第67-68页 |
| 7. MTT法及CCK8检测细胞增殖 | 第68-69页 |
| 8. 细胞集落形成率测定 | 第69页 |
| 9. Transwell体外侵袭实验 | 第69-70页 |
| 10. siRNA干扰ALDH1A1或ALDH1A3的表达 | 第70页 |
| 11. 细胞免疫化学染色 | 第70-71页 |
| 12. 流式检测细胞周期 | 第71页 |
| 13. 细胞凋亡检测 | 第71页 |
| 14. 统计学方法 | 第71-72页 |
| 实验结果 | 第72-85页 |
| 1. 流式检测ALDH在几种结肠癌及肺癌细胞系中的表达 | 第72-73页 |
| 2. ALDH~(high)与ALDH~(low)细胞的生物学特点 | 第73-76页 |
| ·HCT116/A549细胞中ALDH~(high)与ALDH~(low)细胞的分选 | 第73页 |
| ·HCT116/A549细胞中ALDH~(high)与ALDH~(low)细胞的体外生长的差别 | 第73-74页 |
| ·HCT116细胞中ALDH~(high)与ALDH~(low)细胞的集落形成能力差别 | 第74页 |
| ·HCT116细胞中ALDH~(high)与ALDH~(low)细胞周期的差别 | 第74-75页 |
| ·HCT116细胞中ALDH~(high)与ALDH~(low)细胞再培养 | 第75页 |
| ·HCT116细胞中ALDH~(high)与ALDH~(low)细胞的体外侵袭能力的观察 | 第75-76页 |
| 3. ALDH1A1及ALDH1A3在几种结肠癌细胞中的表达情况 | 第76-78页 |
| ·Western boltting检测ALDH1A1及ALDH1A3在几种结肠癌及肺癌细胞系中的表达情况 | 第76-77页 |
| ·间接免疫荧光检测ALDH1A1及ALDH1A3在HCT116/A549细胞中的表达情况 | 第77-78页 |
| 4. siRNA下调ALDH1A1及ALDH1A3对HCT116/A549细胞的影响 | 第78-85页 |
| ·siRNA可有效下调ALDH1A1及ALDH1A3的表达 | 第78页 |
| ·siRNA下调ALDH1A3或ALDH1A1后对HCT116/A549中ALDH~+细胞比例的影响 | 第78-79页 |
| ·siRNA下调ALDH1A1及ALDH1A3后对HCT116/A549细胞凋亡没有影响 | 第79-80页 |
| ·siRNA下调ALDH1A3后对HCT116增殖能力没有影响 | 第80-81页 |
| ·siRNA下调ALDH1A1及ALDH1A3后对A549的增殖能力有不同影响 | 第81页 |
| ·siRNA下调ALDH1A3后对A549细胞周期的影响 | 第81页 |
| ·siRNA下调ALDH1A3后能降低HCT116的体外侵袭能力 | 第81-82页 |
| ·siRNA下调ALDH1A3后能降低A549的体外侵袭能力 | 第82-83页 |
| ·siRNA下调ALDH1A3后能降低HCT116细胞对CoCL_2模拟的低氧环境的耐受 | 第83-85页 |
| 讨论 | 第85-89页 |
| 小结 | 第89-90页 |
| 第三部分：小鼠树突状细胞肉瘤中SRS19-6MULV病毒的检测及致病机理研究 | 第90-106页 |
| 引言 | 第91-92页 |
| 实验材料 | 第92-94页 |
| 实验方法 | 第94-98页 |
| 1. 细胞培养 | 第94页 |
| 2. 培养细胞及组织基因组DNA提取 | 第94-95页 |
| 3. PCR扩增目的片段 | 第95页 |
| 4. PCR产物胶回收 | 第95-96页 |
| 5. 透射电镜检测DCS及SRSV/3T3细胞中有无病毒颗粒 | 第96页 |
| 6. IPCR方法检测SRS19-6MuLV病毒在DCS及SRSV/3T3基因组中的插入位点 | 第96-97页 |
| 7. 序列及插入位点生物信息学分析 | 第97-98页 |
| 实验结果 | 第98-103页 |
| 1. DCS及其他小鼠肿瘤细胞中SRS19-6MuLV病毒的检测结果 | 第98页 |
| 2. 小鼠正常组织、细胞中SRS19-6MuLV病毒的检测结果 | 第98-99页 |
| 3. 小鼠瘤株及SRSV/3T3细胞中SRS19-6MuLV病毒的检测结果 | 第99-100页 |
| 4. 人肿瘤细胞中SRS19-6MuLV病毒的检测结果 | 第100页 |
| 5. 透射电镜检测病毒颗粒 | 第100-101页 |
| 6. SRS19-6MuLV病毒在DCS细胞及SRSV/3T3细胞中插入位点 | 第101页 |
| 7. 序列及插入位点生物信息学分析 | 第101-103页 |
| 讨论 | 第103-105页 |
| 小结 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-114页 |
| 缩略语 | 第114-116页 |
| 文献综述 | 第116-132页 |
| 参考文献 | 第126-132页 |
| 附录：已发表文章 | 第132-134页 |
| 致谢 | 第134-135页 |
| 个人简历 | 第135-136页 |
