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重组HER2胞外段的表达及其卵黄抗体的制备

提要第1-5页
中文摘要第5-8页
ABSTRACT第8-15页
第1章 前言第15-33页
   ·人表皮生长因子受体-2(HER2)简介第15-23页
     ·HER2 的生理功能及作用机制第15-17页
     ·HER2 与肿瘤第17-19页
     ·靶向 HER2 的肿瘤治疗研究第19-23页
   ·卵黄抗体简介第23-29页
     ·卵黄抗体的特点第23-24页
     ·卵黄抗体的应用优势第24-27页
     ·卵黄抗体的应用现状第27-29页
     ·IgY 在应用上的局限性第29页
   ·杆状病毒表达系统(BVES)简介第29-33页
     ·BVES 及其原理简介第29-31页
     ·BVES 的优点第31-33页
第2章 材料与方法第33-51页
   ·实验材料与仪器第33-35页
     ·实验试剂第33页
     ·引物合成及测序由上海生物工程有限公司完成第33页
     ·菌种及质粒第33页
     ·培养基配制第33-34页
     ·细胞株和实验动物:第34页
     ·主要实验设备第34-35页
   ·实验方法第35-51页
     ·HER2-ECD 在大肠杆菌中的构建、表达及鉴定第35-43页
     ·rHER2-ECD 特异性卵黄抗体的制备第43-46页
     ·HER2-ECD 在杆状病毒表达系统(BVES)中的表达第46-51页
第3章 实验结果第51-71页
   ·rHER2-ECD 在大肠杆菌中的构建、表达及鉴定第51-58页
     ·HER2-ECD 基因的获取、T-A 克隆的构建及其鉴定第51-52页
     ·HER2-ECD 基因亚克隆至 PET-28a 表达载体及其鉴定第52-53页
     ·rHER2-ECD 的诱导表达及鉴定第53-58页
   ·抗 rHER2-ECD 卵黄抗体的制备第58-63页
     ·rHER2-ECD 免疫蛋鸡第58-59页
     ·间接 ELISA 方法检测鸡 H/鸡 B 血清及卵黄中特异性抗体的产生第59-60页
     ·卵黄抗体滴度检测第60-61页
     ·Western Blot 检测 IgY-HER2 是否可识别肿瘤细胞中的HER2第61-63页
   ·HER2-ECD 在杆状病毒表达系统中的表达第63-71页
     ·HER2-ECD 基因的获取及 T-A 克隆的构建第63-64页
     ·HER2-ECD 基因亚克隆至转移载体 pFastBacTM1 中及其鉴定第64-65页
     ·pFastBacTM1-HER2-ECD 转化 DH10Bac 及重组子的筛选第65-66页
     ·重组 Bacmid-HER2-ECD 质粒转染 Sf-9 昆虫细胞第66-69页
     ·SDS-PAGE 分析 rHER2-ECD 的表达情况第69-71页
第4章 讨论第71-79页
   ·rHER2-ECD 在大肠杆菌表达量低的原因的探讨第71-72页
   ·纯化的 rHER22-ECD 混有杂蛋白的原因分析第72-73页
   ·蛋白免疫蛋鸡后产生的卵黄抗体滴度不高的原因分析第73-74页
   ·Western blot 检测 rHER2-ECD 特异性卵黄抗体对高表达HER2 的乳腺癌细胞的识别作用时,结果呈多条带显色的原因分析第74-75页
   ·卵黄和血清中的特异性 IgY 的比较第75-76页
   ·rHER2-ECD 在杆状病毒表达系统中表达失败的原因分析第76-79页
结论第79-81页
参考文献第81-89页
攻读学位期间取得的科研成果第89-91页
致谢第91-93页

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