| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-33页 |
| ·水产养殖的病害 | 第14页 |
| ·重要的水产养殖致病菌-迟钝爱德华氏菌 | 第14-19页 |
| ·爱德华氏菌属分类及爱德华氏菌病 | 第14-16页 |
| ·迟钝爱德华氏菌主要毒力因子 | 第16-19页 |
| ·迟钝爱德华氏菌分型研究 | 第19-20页 |
| ·细菌分泌系统 | 第20-24页 |
| ·Ⅰ型分泌系统 | 第20页 |
| ·Ⅱ型分泌系统 | 第20-21页 |
| ·Ⅲ型分泌系统 | 第21-22页 |
| ·Ⅳ型分泌系统 | 第22页 |
| ·Ⅴ型分泌系统 | 第22页 |
| ·Ⅵ型分泌系统 | 第22-24页 |
| ·Ⅶ型分泌系统 | 第24页 |
| ·Sec系统 | 第24页 |
| ·双精氨酸转运(Tat)系统 | 第24页 |
| ·Tat系统 | 第24-31页 |
| ·Tat系统组成 | 第25-27页 |
| ·Tat系统底物 | 第27页 |
| ·Tat系统信号肽 | 第27-28页 |
| ·Tat系统作用机理 | 第28-29页 |
| ·Tat系统功能 | 第29-30页 |
| ·Tat系统的生物技术应用 | 第30-31页 |
| ·本研究的主要内容及意义 | 第31-33页 |
| 第2章 迟钝爱德华氏菌Tat系统基因簇分析 | 第33-54页 |
| ·前言 | 第33-34页 |
| ·实验材料 | 第34-37页 |
| ·菌株、引物和培养条件 | 第34-37页 |
| ·试剂和仪器设备 | 第37页 |
| ·缓冲液 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-40页 |
| ·Tat组分元件转录特性分析 | 第37-38页 |
| ·生理生化特性鉴定 | 第38-39页 |
| ·血细胞凝集实验 | 第39页 |
| ·溶血活性检测 | 第39页 |
| ·DNA抽提和PCR反应 | 第39-40页 |
| ·数据处理 | 第40页 |
| ·斑马鱼致死率实验 | 第40页 |
| ·实验结果 | 第40-51页 |
| ·E.tarda EIB202 Tat基因簇 | 第40-42页 |
| ·生理特性 | 第42-43页 |
| ·细胞凝集能力和溶血活性 | 第43-45页 |
| ·斑马鱼致死率 | 第45-46页 |
| ·毒力相关基因分析 | 第46-48页 |
| ·ERIC-PCR和BOX-PCR聚簇分析 | 第48-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| ·本章小结 | 第53-54页 |
| 第3章 迟钝爱德华氏菌Tat系统表型特征 | 第54-79页 |
| ·前言 | 第54页 |
| ·实验材料 | 第54-56页 |
| ·菌株、引物和培养条件 | 第54-56页 |
| ·试剂和仪器设备 | 第56页 |
| ·实验方法 | 第56-68页 |
| ·无标记缺失突变株的构建 | 第56-61页 |
| ·回补菌株的构建 | 第61-62页 |
| ·Tat系统运输功能评价 | 第62-64页 |
| ·生长测定 | 第64页 |
| ·形态学观察 | 第64-65页 |
| ·H_2S产生能力测定 | 第65页 |
| ·运动性测定 | 第65页 |
| ·生物被膜测定 | 第65页 |
| ·细胞凝集能力测定 | 第65页 |
| ·自聚集能力测定 | 第65-66页 |
| ·溶血活性测定 | 第66页 |
| ·压力应激能力测定 | 第66-67页 |
| ·细胞黏附、胞内寄生能力测定 | 第67-68页 |
| ·对鱼半致死率测定 | 第68页 |
| ·实验结果 | 第68-76页 |
| ·Tat系统元件缺失株构建 | 第68-69页 |
| ·Tat系统组分回补株构建 | 第69页 |
| ·Tat系统运输蛋白到周质空间 | 第69-70页 |
| ·菌体生长 | 第70-71页 |
| ·Tat系统不影响菌落形态 | 第71页 |
| ·Tat系统影响H_2S产生 | 第71-72页 |
| ·Tat系统影响运动性 | 第72页 |
| ·Tat系统不影响生物被膜形成 | 第72页 |
| ·Tat系统影响血细胞凝集能力 | 第72页 |
| ·Tat系统影响细菌自聚集 | 第72-74页 |
| ·Tat系统影响溶血活性 | 第74页 |
| ·Tat系统与压力应激的关系 | 第74-75页 |
| ·Tat系统影响细胞黏附、胞内寄生能力 | 第75-76页 |
| ·Tat系统影响E.arda毒力 | 第76页 |
| ·讨论 | 第76-77页 |
| ·本章小结 | 第77-79页 |
| 第4章 迟钝爱德华氏菌Tat系统蛋白质组学研究 | 第79-97页 |
| ·前言 | 第79-80页 |
| ·实验材料 | 第80-81页 |
| ·菌株、引物和培养条件 | 第80页 |
| ·试剂和仪器设备 | 第80-81页 |
| ·实验方法 | 第81-84页 |
| ·全菌裂解蛋白样品的制备 | 第81页 |
| ·周质空间蛋白样品的制备 | 第81-82页 |
| ·胞外蛋白样品的制备 | 第82页 |
| ·双向蛋白电泳步骤 | 第82-83页 |
| ·质谱鉴定 | 第83页 |
| ·Shotgun HPLC-ESI-MS/MS操作步骤 | 第83-84页 |
| ·实验结果 | 第84-90页 |
| ·全菌裂解蛋白谱变化 | 第84-87页 |
| ·周质空间蛋白谱变化 | 第87-89页 |
| ·胞外蛋白谱变化 | 第89-90页 |
| ·高盐环境下全菌裂解蛋白谱变化 | 第90页 |
| ·讨论 | 第90-96页 |
| ·本章小结 | 第96-97页 |
| 第5章 Tat系统作为生物安全限制系统的应用 | 第97-106页 |
| ·前言 | 第97页 |
| ·实验材料 | 第97-98页 |
| ·菌株、引物和培养条件 | 第97页 |
| ·试剂和仪器设备 | 第97-98页 |
| ·实验方法 | 第98-100页 |
| ·候选疫苗WYM1的构建 | 第98页 |
| ·ΔtatABCD在不同盐度下的生长 | 第98-99页 |
| ·WYM1在鱼体内的存活能力 | 第99页 |
| ·WYM1在水体中的存活能力 | 第99页 |
| ·WYM1免疫保护力评价 | 第99-100页 |
| ·实验结果 | 第100-103页 |
| ·候选疫苗株WYM1的构建 | 第100页 |
| ·ΔtatABCD在高盐下生长受抑制 | 第100-102页 |
| ·WYM1可在鱼体内增殖 | 第102页 |
| ·WYM1在海水中存活能力下降 | 第102页 |
| ·WYM1免疫效力评价 | 第102-103页 |
| ·讨论 | 第103-105页 |
| ·本章小结 | 第105-106页 |
| 第6章 基于Tat系统信号肽构建多效价载体减毒活疫苗 | 第106-120页 |
| ·前言 | 第106-107页 |
| ·实验材料 | 第107页 |
| ·菌株、引物和培养条件 | 第107页 |
| ·试剂和仪器设备 | 第107页 |
| ·实验方法 | 第107-111页 |
| ·菌株构建 | 第107-110页 |
| ·Western blotting检测GFP和GapA的业细胞定位 | 第110-111页 |
| ·实时定量PCR测定gfp转录水平 | 第111页 |
| ·RNA二级结构预测 | 第111页 |
| ·免疫保护率测定 | 第111页 |
| ·实验结果 | 第111-118页 |
| ·Tat系统信号肽特征 | 第111-113页 |
| ·GFP在细胞亚组分的定位 | 第113页 |
| ·gfp转录水平测定 | 第113-115页 |
| ·GapA的亚细胞定位 | 第115-116页 |
| ·候选疫苗株免疫效力评价 | 第116-118页 |
| ·讨论 | 第118-119页 |
| ·本章小结 | 第119-120页 |
| 第7章 结论和创新点 | 第120-124页 |
| ·主要结论 | 第120-122页 |
| ·论文创新点 | 第122页 |
| ·展望 | 第122-124页 |
| 缩略语 | 第124-125页 |
| 参考文献 | 第125-137页 |
| 攻读博士学位期间研究成果 | 第137-138页 |
| 致谢 | 第138页 |
