| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-28页 |
| ·木聚糖酶的研究进展 | 第12-22页 |
| ·木聚糖介绍 | 第12页 |
| ·木聚糖结构 | 第12-13页 |
| ·木聚糖酶复合体 | 第13-16页 |
| ·木聚糖酶复合体的协同作用 | 第16-17页 |
| ·嗜温和嗜热资源来源地木聚糖酶 | 第17页 |
| ·木聚糖酶产品 | 第17-18页 |
| ·木聚糖酶的应用 | 第18-21页 |
| ·木聚糖酶蛋白质家族 | 第21-22页 |
| ·毕赤酵母表达系统的研究进展 | 第22-23页 |
| ·荧光定量PCR技术 | 第23-26页 |
| ·SYBR Green Ⅰ | 第24-25页 |
| ·TaqMan探针 | 第25-26页 |
| ·本研究的前期工作 | 第26-27页 |
| ·本研究的目的 | 第27-28页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第28-39页 |
| ·实验材料和仪器设备 | 第28-31页 |
| ·实验菌株 | 第28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·质粒 | 第28-29页 |
| ·引物 | 第29页 |
| ·酶和试剂 | 第29页 |
| ·仪器和设备 | 第29-30页 |
| ·主要缓冲液 | 第30-31页 |
| ·方法 | 第31-39页 |
| ·细菌总DNA的抽提 | 第31页 |
| ·酵母总DNA的抽提 | 第31页 |
| ·质粒DNA的抽提 | 第31-32页 |
| ·RBB木聚糖的制备 | 第32页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第32页 |
| ·大肠杆菌重组子的筛选 | 第32-33页 |
| ·序列分析 | 第33页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞的制备及转化 | 第33-34页 |
| ·木聚糖酶毕赤酵母表达载体的构建与验证 | 第34页 |
| ·重组毕赤酵母在底物平板上的诱导表达 | 第34页 |
| ·外源基因在毕赤酵母中的高密度诱导表达 | 第34页 |
| ·木聚糖酶的纯化 | 第34页 |
| ·酶的去糖基化处理 | 第34页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第34页 |
| ·SDS-PAGE检测表达蛋白 | 第34-35页 |
| ·实时荧光定量PCR检测毕赤酵母基因组中外源基因拷贝数 | 第35-37页 |
| ·酶解液中还原糖含量的测定(DNS法) | 第37页 |
| ·酶学性质测定 | 第37-38页 |
| ·酶动力学常数Km、Vmax的测定 | 第38-39页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第39-50页 |
| ·序列分析 | 第39-41页 |
| ·木聚糖酶xyn186基因毕赤酵母表达质粒的构建 | 第41-42页 |
| ·木聚糖酶xyn186基因毕赤酵母表达质粒的验证 | 第42-43页 |
| ·重组质粒pHBM905A-xyn186向毕赤酵母的转化 | 第43页 |
| ·木聚糖酶XYN186的诱导表达及纯化 | 第43-44页 |
| ·重组木聚糖酶XYN186的去糖基化处理 | 第44-45页 |
| ·木聚糖酶XYN186的最适温度和热敏感性 | 第45页 |
| ·木聚糖酶XYN186的最适pH和pH稳定性研究 | 第45-46页 |
| ·金属离子和化学试剂对木聚糖酶XYN186的影响 | 第46-47页 |
| ·木聚糖酶XYN186的底物特异性研究 | 第47-48页 |
| ·木聚糖酶XYN186的酶动力学研究 | 第48页 |
| ·实时荧光定量PCR检测毕赤酵母基因组中外源基因拷贝数 | 第48-50页 |
| 第四部分 讨论 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 研究生期间参与发表的文章与专利 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
