| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第11-19页 |
| ·轮状病毒结构和分类 | 第11-12页 |
| ·轮状病毒主要结构蛋白和非结构蛋白的功能特性 | 第12-13页 |
| ·轮状病毒的发病和免疫机制 | 第13-15页 |
| ·轮状病毒疫苗研究进展 | 第15-17页 |
| ·人轮状病毒疫苗研究进展 | 第15-16页 |
| ·猪轮状病毒疫苗研究进展 | 第16-17页 |
| ·乳酸菌用作口服疫苗活菌传递载体的研究进展 | 第17-18页 |
| ·研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-30页 |
| ·材料 | 第19-21页 |
| ·病毒与细胞 | 第19页 |
| ·质粒、菌种 | 第19页 |
| ·抗体和抗原制剂 | 第19页 |
| ·实验动物 | 第19页 |
| ·引物 | 第19-20页 |
| ·主要分子生物学试剂 | 第20页 |
| ·培养基 | 第20页 |
| ·主要溶液配制 | 第20页 |
| ·主要实验仪器与设备 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-30页 |
| ·猪轮状病毒突变前和突变后NSP4基因的扩增 | 第21-22页 |
| ·表达突变前后NSP4基因重组大肠杆菌的构建 | 第22-24页 |
| ·突变前后NSP4基因在大肠杆菌中的诱导表达和纯化 | 第24页 |
| ·突变前后NSP4蛋白致BALB/c乳鼠腹泻的差异比较 | 第24页 |
| ·VP7和NSP4-VP7重组干酪乳杆菌表达系统构建 | 第24-28页 |
| ·VP7和NSP4-VP7基因在重组干酪乳杆菌中的表达和鉴定 | 第28-29页 |
| ·口服重组干酪乳杆菌免疫效果分析 | 第29-30页 |
| 3 结果 | 第30-44页 |
| ·突变前后NSP4基因的克隆 | 第30-31页 |
| ·突变前后NSP4基因的PCR扩增结果 | 第30页 |
| ·重组质粒pMD18-TS-NSP4(NSP4_(MUT))的鉴定结果 | 第30-31页 |
| ·表达突变前后NSP4基因重组大肠杆菌的构建 | 第31-32页 |
| ·重组蛋白表达分析及免疫活性分析结果 | 第32-34页 |
| ·SDS-PAGE分析结果 | 第32-33页 |
| ·Western-blot分析结果 | 第33-34页 |
| ·突变前后NSP4蛋白致腹泻能力比较 | 第34页 |
| ·重组干酪乳杆菌表达系统的构建 | 第34-37页 |
| ·VP7基因的扩增结果 | 第34-35页 |
| ·NSP4-VP7基因的克隆结果 | 第35-36页 |
| ·pMD18-TS-NSP4-VP7重组载体的鉴定结果 | 第36页 |
| ·pPG-1-VP7、pPG-1-NSP4-VP7和pPG-2-NSP4-VP7重组载体的鉴定结果 | 第36-37页 |
| ·目的基因在重组干酪乳杆菌中的表达鉴定结果 | 第37-39页 |
| ·Western-blot鉴定结果 | 第37-38页 |
| ·间接免疫荧光鉴定结果 | 第38-39页 |
| ·重组干酪乳杆菌免疫效果评价 | 第39-44页 |
| ·血清IgG的测定结果 | 第39-40页 |
| ·小鼠外生殖道黏液sIgA的测定结果 | 第40-41页 |
| ·小鼠粪便sIgA的测定结果 | 第41-42页 |
| ·血清中NSP4中和抗体测定结果 | 第42-44页 |
| 4 讨论 | 第44-47页 |
| ·猪轮状病毒NSP4蛋白氨基酸位点突变对其肠毒素作用的影响 | 第44页 |
| ·口服重组干酪乳杆菌的免疫效果评价 | 第44-46页 |
| ·NSP4蛋白在重组干酪乳杆菌免疫中的佐剂作用 | 第46-47页 |
| 5 结论 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 附录 | 第54-57页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第57页 |
