| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-21页 |
| 1 元基因组研究现状以及前景 | 第10-14页 |
| ·元基因组的概念 | 第10页 |
| ·元基因文库的构建 | 第10-12页 |
| ·元基因组的研究进展 | 第12-13页 |
| ·元基因组的前景 | 第13-14页 |
| 2 454测序技术 | 第14-16页 |
| 3 各种酶在食品工业中的应用 | 第16-20页 |
| ·纤维素酶在食品中的应用 | 第17页 |
| ·淀粉酶在食品工业中的应用 | 第17-18页 |
| ·木聚糖酶在食品中的应用 | 第18页 |
| ·β-葡聚糖酶在食品中的应用 | 第18-19页 |
| ·蛋白酶在食品中的应用 | 第19页 |
| ·酯酶在食品中的应用 | 第19-20页 |
| 本研究的目的与意义 | 第20-21页 |
| 第二章 湖南热泉建库以及洱源Bac文库阳性克隆测序分析 | 第21-32页 |
| 1 材料与方法 | 第21-25页 |
| ·材料与设备 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-25页 |
| ·湖南热泉建库前期准备 | 第21-23页 |
| ·洱源热泉样品454测序 | 第23-24页 |
| ·BAC克隆质粒提取以及进一步测序 | 第24-25页 |
| 2 结果与分析 | 第25-31页 |
| ·湖南热泉土壤DNA提取 | 第25-26页 |
| ·郴州样品16SrRNA基因扩增结果 | 第26-27页 |
| ·拼接序列数据分析 | 第27-29页 |
| ·淀粉酶、甘露聚糖酶BAC克隆的进一步测序 | 第29-31页 |
| 3 结论 | 第31页 |
| 4 讨论 | 第31-32页 |
| 第三章 洱源文库中食品工业酶基因的克隆表达 | 第32-48页 |
| 1 材料与方法 | 第32-39页 |
| ·材料与设备 | 第32-33页 |
| ·方法 | 第33-39页 |
| ·筛库获得的阳性克隆进行基因组提取 | 第33页 |
| ·设计引物 | 第33页 |
| ·PCR的方法克隆纤维素酶基因与载体连接 | 第33-34页 |
| ·凝胶回收试剂盒对PCR产物进行回收 | 第34-35页 |
| ·目的片段与载体双酶切 | 第35页 |
| ·酶切后的目的片段与载体连接 | 第35页 |
| ·目的基因转至BL21进行表达以及测序鉴定 | 第35-36页 |
| ·蛋白的诱导表达 | 第36-37页 |
| ·SDS-PAGE鉴定目的蛋白表达 | 第37页 |
| ·淀粉酶的纯化 | 第37页 |
| ·酶液酶学性质分析 | 第37-39页 |
| 2 结果 | 第39-46页 |
| ·纤维素酶克隆表达以及初步鉴定 | 第39-40页 |
| ·淀粉酶基因克隆表达及初步鉴定 | 第40-41页 |
| ·木聚糖酶基因克隆表达以及初步鉴定 | 第41-42页 |
| ·葡聚糖酶基因克隆表达以及粗酶性质结果 | 第42-43页 |
| ·葡萄糖苷(脂)酰鞘氨醇酶PCR扩增结果以及SDS_PAGE分析 | 第43页 |
| ·蛋白酶基因克隆表达以及粗酶性质结果 | 第43-44页 |
| ·酯酶基因克隆表达以及粗酶性质结果 | 第44-45页 |
| ·淀粉酶纯化 | 第45-46页 |
| 3 结论 | 第46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| 第四章 β-1,3-葡聚糖酶纯化以及酶学性质分析 | 第48-57页 |
| 1 材料与方法 | 第48-51页 |
| ·材料与设备 | 第48页 |
| ·方法 | 第48-51页 |
| ·菌体诱导培养,集菌 | 第48-49页 |
| ·超声波破碎 | 第49页 |
| ·HPLC纯化蛋白 | 第49页 |
| ·最适温度 | 第49页 |
| ·最适pH | 第49页 |
| ·热稳定性 | 第49页 |
| ·金属离子对酶活的影响 | 第49-50页 |
| ·底物特异性分析 | 第50页 |
| ·考马斯亮蓝法测定蛋白浓度 | 第50页 |
| ·动力学性质分析 | 第50-51页 |
| 2 结果分析 | 第51-56页 |
| ·测序以及序列分析 | 第51-52页 |
| ·葡聚糖酶的表达以及纯化 | 第52-53页 |
| ·酶活及底物特异性测定 | 第53页 |
| ·葡聚糖酶酶学性质 | 第53-55页 |
| ·酶的动力学性质 | 第55-56页 |
| 3 结论 | 第56页 |
| 4 讨论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 本文主要结论 | 第63-64页 |
| 本文创新点与展望 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 作者简介 | 第66页 |