| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 资助基金 | 第10-11页 |
| 目录 | 第11-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-44页 |
| ·主要实验仪器、试剂与耗材 | 第19-22页 |
| ·主要实验仪器 | 第19-20页 |
| ·主要的试剂与耗材 | 第20-21页 |
| ·主要溶液的配置 | 第21-22页 |
| ·CMT1A致病PMP22基因重复特异REP连接片段的PCR-双酶切 | 第22-27页 |
| ·研究对象 | 第22页 |
| ·gDNA抽提及定量 | 第22-25页 |
| ·PMP22等位基因特异PCR双酶切 | 第25-26页 |
| ·PCR反应体系及扩增条件 | 第26页 |
| ·PCR扩增产物电泳验证 | 第26-27页 |
| ·双酶切验证 | 第27页 |
| ·CMTX1致病CX32基因PCR-直接测序 | 第27-30页 |
| ·研究对象及gDNA抽提及定量 | 第27-28页 |
| ·CX32目的基因片段扩增 | 第28-30页 |
| ·CMT2A致病MFN2基因PCR-直接测序 | 第30-35页 |
| ·研究对象及gDNA抽提及定量 | 第30-31页 |
| ·MFN2目的基因片段扩增 | 第31-35页 |
| ·CX32基因65(G>A)位点突变致CMT的表达研究分析 | 第35-44页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第35页 |
| ·目的片段验证及PCR产物纯化 | 第35-36页 |
| ·纯化产物加A尾(A-tailing) | 第36页 |
| ·低熔点琼脂糖凝胶跑胶回收产物 | 第36页 |
| ·PCR产物与pGEM-T载体的链接反应 | 第36-37页 |
| ·T链接产物的转化 | 第37-38页 |
| ·挑选克隆摇菌 | 第38页 |
| ·菌液PCR鉴定+保菌 | 第38页 |
| ·抽提质粒 | 第38-39页 |
| ·鉴定克隆 | 第39页 |
| ·pGEM-T载体酶切目的片段链接至pEGFP-N1质粒 | 第39-40页 |
| ·pEGFP-N1质粒转化、挑克隆、摇菌、保菌、抽质粒、质粒鉴定(步骤大致同前) | 第40-41页 |
| ·pEGFP-N1-mtCX32(F-R-15815)、pEGFP-N1-wtCX32(F-R-582)转染入Hela人宫颈癌传代细胞 | 第41-43页 |
| ·细胞制片 | 第43-44页 |
| 第三章结果 | 第44-50页 |
| ·CMT1A致病PMP22基因重复特异REP连接 | 第44-46页 |
| ·PMP22基因重复特异REP连接片段的PCR产物 | 第44-46页 |
| ·CMTX1致病CX32基因PCR-直接测序结果 | 第46-47页 |
| ·CMT2A2致病MFN2基因PCR-直接测序结果 | 第47-48页 |
| ·CX32(c.65G>A)质粒构建、转化、转染实验结果 | 第48-50页 |
| ·PCR产物直接测序进行验证,突变型c.65G>A | 第48页 |
| ·转化 | 第48页 |
| ·成功构建pEGFP-N1-wtCX32及pEGFP-N1-mtCX32质粒测序验证对照 | 第48-49页 |
| ·CX32(c.65G>A)转染Hela细胞 | 第49-50页 |
| 第四章 讨论 | 第50-56页 |
| ·CMT常见致病基因PMP22、CX32、MFN2基因突变检测结果分析 | 第50-54页 |
| ·CX32功能表达研究 | 第54-56页 |
| 第五章 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 附录 PMP22基因多种检测方法研究进展 | 第61-71页 |
| 参考文献 | 第68-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 已发表论文 | 第72页 |
