| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 文献综述 | 第11-30页 |
| 第一章 转基因家畜概况 | 第11-24页 |
| ·经典转基因策略 | 第11-12页 |
| ·显微注射技术 | 第11页 |
| ·体细胞核移植技术 | 第11-12页 |
| ·新兴的转基因策略 | 第12-20页 |
| ·慢病毒载体介导的转基因技术 | 第12-13页 |
| ·条件性表达的转基因技术 | 第13页 |
| ·多能性细胞介导的转基因技术 | 第13-15页 |
| ·RNA 介导的基因干扰技术 | 第15页 |
| ·转座子系统介导的转基因技术 | 第15-16页 |
| ·位点特异性整合酶介导的基因整合 | 第16-18页 |
| ·基因打靶介导的转基因技术 | 第18-20页 |
| ·锌指核酸酶介导的打靶技术 | 第20页 |
| ·转基因家畜的应用 | 第20-24页 |
| ·转基因家畜在生物医学和基础医学中的应用 | 第20-22页 |
| ·转基因家畜在农业生产中的应用 | 第22-24页 |
| 第二章 溶葡萄球菌素基因概述 | 第24-30页 |
| ·溶葡萄球菌素的理化特性 | 第24页 |
| ·溶葡萄球菌素的酶学特性 | 第24-25页 |
| ·溶葡萄球菌素的抗菌功能 | 第25页 |
| ·溶葡萄球菌素的克隆表达研究 | 第25-26页 |
| ·溶葡萄球菌素的应用 | 第26-28页 |
| ·溶葡萄球菌素在医学治疗上的应用 | 第26-27页 |
| ·溶葡萄球菌素在其他方面的应用 | 第27-28页 |
| ·小结 | 第28-30页 |
| 实验部分 | 第30-53页 |
| 第三章 乳腺特异性表达载体 pEGFP-C1MAB 的构建 | 第30-41页 |
| ·材料与方法 | 第30-34页 |
| ·材料 | 第30-31页 |
| ·方法 | 第31-34页 |
| ·结果 | 第34-39页 |
| ·目的基因的 T-A 克隆 | 第34-35页 |
| ·β-酪蛋白 5′端与 3′端扩增及 pCSN53lys 载体构建与鉴定 | 第35-36页 |
| ·attB 位点和鸡β球蛋白绝缘子的克隆及 pattBInsulor12 载体构建与鉴定 | 第36-38页 |
| ·loxP 位点的添加及 pEGFP-C1M 载体的构建与鉴定 | 第38页 |
| ·乳腺特异表达载体 pEGFP-C1MAB 的构建与鉴定 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39页 |
| ·小结 | 第39-41页 |
| 第四章 转溶葡萄球菌素基因细胞的制备与鉴定 | 第41-49页 |
| ·材料与方法 | 第41-43页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-43页 |
| ·结果 | 第43-47页 |
| ·乳腺特异性表达载体 pEGFP-C1MAB 的纯化 | 第43页 |
| ·牛耳成纤维细胞的转染、单克隆细胞的筛选及鉴定 | 第43-46页 |
| ·阳性细胞的多重 PCR 鉴定 | 第46-47页 |
| ·阳性细胞的 Southern blotting 鉴定 | 第47页 |
| ·阳性细胞的核型分析 | 第47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 第五章 重组溶葡萄球菌素在牛乳腺上皮细胞的表达 | 第49-53页 |
| ·材料和方法 | 第49-50页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·方法 | 第49-50页 |
| ·结果 | 第50-51页 |
| ·pEGFP-C1MAB 载体的纯化 | 第50页 |
| ·乳腺上皮细胞的分离与纯化 | 第50-51页 |
| ·乳腺上皮细胞的转染及绿色荧光蛋白的表达 | 第51页 |
| ·溶葡萄球菌素在乳腺上皮细胞中的表达 | 第51页 |
| ·讨论 | 第51-52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| 论文总结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-62页 |
| 附录一 载体构建过程 | 第62-64页 |
| 附录二 主要仪器 | 第64-65页 |
| 附录三 主要试剂 | 第65-67页 |
| 附录四 主要试剂配制 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 个人简介 | 第70页 |
