A型流感病毒NS1基因密码子去优化改造引起病毒毒力减弱的研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 第1章 序论 | 第9-24页 |
| ·流感病毒 | 第9-18页 |
| ·病毒简介 | 第9页 |
| ·病毒的基因组 | 第9-10页 |
| ·病毒基因组的编码产物 | 第10-16页 |
| ·病毒的复制 | 第16-18页 |
| ·病毒抗原性的改变 | 第18页 |
| ·三次全球流感大流行 | 第18-19页 |
| ·1918~1919“西班牙流感” | 第18-19页 |
| ·1957~1958“亚洲流感” | 第19页 |
| ·1968~1969“香港流感” | 第19页 |
| ·抗流感药物和流感疫苗 | 第19-24页 |
| ·抗流感药物 | 第19-20页 |
| ·流感疫苗 | 第20-24页 |
| 第2章 前言 | 第24-29页 |
| ·流感病毒的反向遗传操作技术 | 第24-27页 |
| ·流感病毒的反向遗传操作技术的建立 | 第24-26页 |
| ·反向遗传操作技术在疫苗研究中的应用 | 第26-27页 |
| ·密码子改造在脊髓灰质炎疫苗研制中的应用 | 第27-28页 |
| ·NS1 基因密码子去优化改造 | 第28-29页 |
| 第3章 材料与方法 | 第29-47页 |
| ·实验材料 | 第29-31页 |
| ·MDCK 与293T 细胞系 | 第29页 |
| ·质粒与载体 | 第29页 |
| ·病毒和实验动物 | 第29页 |
| ·仪器 | 第29-30页 |
| ·试剂与试剂盒 | 第30-31页 |
| ·溶液配制 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-47页 |
| ·196鸡红血细胞悬液的制备 | 第31页 |
| ·病毒扩增 | 第31-32页 |
| ·HA 血凝检测 | 第32页 |
| ·EID50 测定 | 第32-33页 |
| ·密码子去优化NS 基因的设计与合成 | 第33-35页 |
| ·pPOLI-deoNS 转录质粒的制备与鉴定 | 第35-36页 |
| ·MDCK 与293T 细胞培养 | 第36-37页 |
| ·293T/MDCK 混合细胞转染及病毒拯救 | 第37-38页 |
| ·病毒鉴定 | 第38-40页 |
| ·噬斑形成实验和免疫染色 | 第40页 |
| ·荧光实时定量PCR | 第40-45页 |
| ·小鼠致病力实验 | 第45-47页 |
| 第4章 结果与分析 | 第47-61页 |
| ·密码子去优化NS1 基因的设计及分析 | 第47-52页 |
| ·密码子去优化NS1 基因的设计方案 | 第47-51页 |
| ·密码子去优化NS1 基因的分析 | 第51-52页 |
| ·DEONS 病毒的拯救及鉴定 | 第52-53页 |
| ·12 质粒的制备和共转染 | 第52页 |
| ·病毒扩增和血凝试验 | 第52页 |
| ·病毒基因组RNA RT-PCR | 第52-53页 |
| ·噬斑形成实验 | 第53-55页 |
| ·病毒在MDCK 细胞上的噬斑实验 | 第53-54页 |
| ·病毒滴度的测定 | 第54-55页 |
| ·病毒在MDCK 细胞中生长曲线的测定 | 第55-58页 |
| ·熔解曲线和标准曲线 | 第55-57页 |
| ·病毒尿囊液中基因拷贝数的测定 | 第57页 |
| ·病毒在MDCK 细胞中生长曲线 | 第57-58页 |
| ·小鼠致病力实验 | 第58-61页 |
| ·小鼠体重变化 | 第58-59页 |
| ·小鼠肺脏病毒滴定 | 第59-61页 |
| 第5章 讨论 | 第61-63页 |
| 第6章 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-75页 |
| 附录 | 第75-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第83页 |
