| 目录 | 第1-9页 |
| 图表索引 | 第9-12页 |
| 英文缩略词 | 第12-13页 |
| 摘要 | 第13-16页 |
| ABSTRACT | 第16-19页 |
| 第一部分:卵巢癌相关分泌/释放蛋白质组的建立 | 第19-78页 |
| 第一章 导论 | 第19-38页 |
| 一、卵巢癌的异质性 | 第19-25页 |
| 1. 卵巢上皮癌的组织起源 | 第19-22页 |
| 2. 卵巢上皮癌的分型 | 第22-25页 |
| 二、外周血卵巢癌相关蛋白标志物 | 第25-31页 |
| 1. 卵巢癌筛查 | 第25-27页 |
| 2. 外周血卵巢癌相关蛋白标志物的研究进展 | 第27-31页 |
| 三、卵巢癌相关分泌蛋白质组 | 第31-34页 |
| 1. 血浆蛋白质组 | 第32-33页 |
| 2. 肿瘤组织周边液体蛋白质组 | 第33页 |
| 3. 卵巢癌细胞系分泌蛋白质组 | 第33-34页 |
| 四、肿瘤微环境与肿瘤进化 | 第34-36页 |
| 1. 细胞外基质 | 第34页 |
| 2. 肿瘤细胞外基质的"进化" | 第34-36页 |
| 五、本课题的研究目的和研究策略 | 第36-38页 |
| 第二章 材料与方法 | 第38-53页 |
| 一、实验材料 | 第38-45页 |
| 1. 临床样品 | 第38-41页 |
| 2. 蛋白水平检测系统 | 第41-42页 |
| 3. 细胞培养主要材料与试剂 | 第42页 |
| 4. 蛋白浓缩、定量和SDS-PAGE电泳主要材料与试剂 | 第42-43页 |
| 5. 质谱鉴定主要材料与试剂 | 第43页 |
| 6. ELISA主要材料与试剂 | 第43页 |
| 7. IHC分析主要材料与试剂 | 第43-44页 |
| 8. 常用试剂的配制 | 第44-45页 |
| 9. 主要仪器 | 第45页 |
| 10. 主要分析软件 | 第45页 |
| 二、实验方法 | 第45-53页 |
| 1. 原代器官培养 | 第45-46页 |
| 2. 条件培养基的收集 | 第46页 |
| 3. 条件培养基SDS-PAGE电泳分离 | 第46-48页 |
| 4. 条件培养基蛋白全谱的LC-MS/MS鉴定分析 | 第48-50页 |
| 5. 条件培养基蛋白全谱的生物信息学分析 | 第50页 |
| 6. 血浆中条件培养基蛋白水平的检测 | 第50-51页 |
| 7. 免疫组织化学染色 | 第51-52页 |
| 8. 统计学分析 | 第52-53页 |
| 第三章 实验结果 | 第53-68页 |
| 一、原代器官培养及条件培养基的获得 | 第53-54页 |
| 1. 卵巢癌患者肿瘤组织及其对应正常组织的原代器官培养 | 第53-54页 |
| 2. 条件培养基的收集 | 第54页 |
| 二、卵巢癌相关分泌/释放蛋白质组的建立 | 第54-58页 |
| 1. 原代器官培养条件培养基的蛋白全谱鉴定 | 第54-55页 |
| 2. 卵巢癌相关分泌/释放蛋白质组的生物学特点 | 第55-57页 |
| ·卵巢癌相关分泌/释放蛋白质组的GO分析 | 第55-56页 |
| ·卵巢癌相关分泌/释放蛋白质组的network分析 | 第56-57页 |
| 3. 卵巢癌相关分泌/释放蛋白质组与文献报道数据库的关系 | 第57-58页 |
| ·卵巢癌相关分泌/释放蛋白质组与人血浆蛋白数据库的关系 | 第57-58页 |
| ·卵巢癌相关分泌/释放蛋白质组与其它卵巢癌相关分泌蛋白质组的关系 | 第58页 |
| 三、实体瘤相关分泌/释放蛋白数据库的综合分析 | 第58-61页 |
| 1. 实体瘤相关分泌/释放蛋白数据库的基本特点 | 第59-60页 |
| 2. 肺癌、胰腺癌和卵巢癌相关分泌/释放蛋白质组的特异性分析 | 第60-61页 |
| ·共同蛋白群的特点 | 第60页 |
| ·特异蛋白群的特点 | 第60-61页 |
| 四、候选卵巢癌相关蛋白标志物的验证 | 第61-65页 |
| 1. 待验证蛋白的挑选标准 | 第61页 |
| 2. 血浆中候选蛋白水平的检测 | 第61-64页 |
| 3. 组织中候选蛋白水平的检测 | 第64-65页 |
| 五、卵巢癌联合检测模型的建立 | 第65-68页 |
| 1. 区分卵巢癌患者和健康者的蛋白标志谱 | 第65-66页 |
| 2. 区分卵巢癌患者和非卵巢癌患者的蛋白标志谱 | 第66-68页 |
| 第四章 讨论 | 第68-77页 |
| 一、卵巢癌相关分泌/释放蛋白质组诠释卵巢肿瘤微环境的特点 | 第68-69页 |
| 二、实体瘤相关分泌/释放蛋白数据库反映肿瘤微环境的共性 | 第69-70页 |
| 三、卵巢癌相关分泌/释放蛋白质组富含候选标志物的信息 | 第70-71页 |
| 四、候选卵巢癌相关蛋白标志物筛选和验证 | 第71-74页 |
| 1."器官发育"sub-network | 第71-73页 |
| 2. 候选卵巢癌相关蛋白标志物验证 | 第73页 |
| 3. 经期状态对血浆蛋白浓度的影响 | 第73-74页 |
| 五、卵巢癌联合检测模型的开发 | 第74页 |
| 六、对卵巢癌相关分泌/释放蛋白数据库的展望 | 第74-77页 |
| 1. 待验证蛋白的挑选标准 | 第75-76页 |
| 2. 卵巢癌相关分泌/释放蛋白的潜在临床价值 | 第76页 |
| 3. 高通量蛋白检测平台的构建 | 第76-77页 |
| 小结 | 第77-78页 |
| 第二部分:ENO1在非小细胞肺癌中的功能研究 | 第78-109页 |
| 第一章 导论 | 第78-85页 |
| 一、糖酵解途径与肿瘤 | 第78-82页 |
| 1. 肿瘤细胞的Warburg效应 | 第79-80页 |
| 2. Warburg效应的产生机制 | 第80-82页 |
| 二、ENO1与肿瘤 | 第82-84页 |
| 1. ENO1是潜在的肿瘤标志物 | 第82-83页 |
| 2. ENO1在肿瘤发生发展中的生物学功能 | 第83-84页 |
| 三、本课题的研究目的和研究策略 | 第84-85页 |
| 第二章 材料与方法 | 第85-97页 |
| 一、实验材料 | 第85-90页 |
| 1. 细胞系 | 第85页 |
| 2. 菌株及质粒载体 | 第85-86页 |
| 3. 引物序列 | 第86页 |
| 4. siRNA及siRNA转染试剂 | 第86页 |
| 5. 抗体 | 第86页 |
| ·第一抗体 | 第86页 |
| ·第二抗体 | 第86页 |
| 6. 主要试剂 | 第86-88页 |
| ·主要试剂盒 | 第86-87页 |
| ·其他主要试剂 | 第87-88页 |
| ·细胞培养和质粒转染 | 第87页 |
| ·蛋白提取和Western blot分析 | 第87页 |
| ·免疫细胞化学分析主要试剂 | 第87-88页 |
| ·分子生物学试剂 | 第88页 |
| 7. 常用试剂的配制 | 第88-89页 |
| 8. 主要仪器 | 第89-90页 |
| 9. 主要分析软件 | 第90页 |
| 二、实验方法 | 第90-97页 |
| 1. 分子生物学方法 | 第90-93页 |
| ·构建ENO1真核表达质粒 | 第90-93页 |
| ·提取细胞总蛋白 | 第93页 |
| ·蛋白定量 | 第93页 |
| ·Western blot | 第93页 |
| 2. 细胞生物学方法 | 第93-96页 |
| ·细胞复苏 | 第93-94页 |
| ·细胞冻存 | 第94页 |
| ·细胞传代 | 第94页 |
| ·稳定过表达ENO1的A549细胞株和H520细胞株的筛选 | 第94页 |
| ·siRNA下调A549细胞和H520细胞中ENO1蛋白表达 | 第94-95页 |
| ·CCK-8细胞增殖实验 | 第95页 |
| ·平板集落形成实验 | 第95页 |
| ·划痕实验 | 第95页 |
| ·免疫细胞化学染色 | 第95-96页 |
| 3. 统计学分析 | 第96-97页 |
| 第三章 实验结果 | 第97-104页 |
| 一、ENO1蛋白在各种细胞系中的表达情况 | 第97-98页 |
| 1. ENO1蛋白在非小细胞肺癌细胞系和永生化支气管上皮细胞系中的表达情况 | 第97页 |
| 2. ENO1蛋白在不同阶段永生化支气管上皮细胞系中的表达情况 | 第97-98页 |
| 二、ENO1蛋白表达改变对细胞表型的影响 | 第98-103页 |
| 1. ENO1基因真核表达质粒的构建 | 第98-99页 |
| 2. 稳定过表达ENO1蛋白细胞株的筛选和鉴定 | 第99页 |
| 3. siRNA下调内源性ENO1蛋白表达 | 第99-100页 |
| 4. 稳定过表达和瞬时下调ENO1蛋白对非小细胞肺癌细胞增殖的影响 | 第100-103页 |
| ·稳定过表达和瞬时下调ENO1蛋白对肺腺癌细胞系A549细胞增殖的影响 | 第100-101页 |
| ·稳定过表达和瞬时下调ENO1蛋白对肺鳞癌细胞系H520细胞增殖的影响 | 第101-103页 |
| 三、ENO1调控肺腺癌细胞增殖的分子机制 | 第103-104页 |
| 第四章 讨论 | 第104-108页 |
| 一、ENO1蛋白在肺癌发生早期开始表达异常 | 第104-105页 |
| 二、ENO1促进肺腺癌细胞增殖 | 第105-107页 |
| 三、ENO1可能抑制肺腺癌细胞的运动能力 | 第107-108页 |
| 小结 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-120页 |
| 附表 | 第120-173页 |
| 致谢 | 第173-175页 |
| 个人简历 | 第175-176页 |
