| 摘要 | 第1-4页 |
| SUMMARY | 第4-14页 |
| 缩略词表 | 第14-15页 |
| Ⅰ前言 | 第15-16页 |
| Ⅱ文献综述 | 第16-28页 |
| 1 桃概述 | 第16页 |
| 2 桃果实软化变质的影响因素 | 第16-19页 |
| ·水解酶类 | 第16-17页 |
| ·多聚半乳糖醛酸酶 | 第16页 |
| ·果胶甲酯酶 | 第16-17页 |
| ·β-半乳糖苷酶 | 第17页 |
| ·木葡聚糖内糖基转移酶 | 第17页 |
| ·纤维素酶 | 第17页 |
| ·植物激素 | 第17-18页 |
| ·乙烯 | 第17页 |
| ·脱落酸 | 第17页 |
| ·生长素 | 第17-18页 |
| ·贮藏条件 | 第18-19页 |
| ·温度 | 第18页 |
| ·气体成分 | 第18-19页 |
| ·相对湿度 | 第19页 |
| ·化学药剂 | 第19页 |
| 3 解决果实成熟软化研究进展 | 第19-25页 |
| ·PG 的种类与性质 | 第20页 |
| ·PG 基因在植物基因工程中的应用 | 第20-22页 |
| ·PG 基因及其表达 | 第20-21页 |
| ·PG 基因的克隆与应用 | 第21-22页 |
| ·反义RNA 技术及其在控制果实成熟中的应用 | 第22-25页 |
| ·抑制细胞壁降解控制果实成熟的基因工程 | 第23-24页 |
| ·PG 反义基因途径 | 第23页 |
| ·PE 反义基因途径 | 第23-24页 |
| ·抑制C_2H_4 合成控制果实成熟的基因工程 | 第24页 |
| ·ACC 合成酶反义基因途径 | 第24页 |
| ·ACC 氧化酶反义基因途径 | 第24页 |
| ·色素生物合成分子水平操作 | 第24-25页 |
| 4 启动子 | 第25-26页 |
| ·组成性启动子 | 第25-26页 |
| ·组织特异性启动子 | 第26页 |
| ·诱导型启动子 | 第26页 |
| 5 研究目的和意义 | 第26-28页 |
| Ⅲ试验部分 | 第28-69页 |
| 1 果实特异性E8 启动子的基因克隆 | 第28-46页 |
| ·E8 启动子的基因克隆技术路线 | 第28页 |
| ·实验材料 | 第28-32页 |
| ·材料 | 第28页 |
| ·试剂 | 第28页 |
| ·质粒 | 第28页 |
| ·菌株 | 第28页 |
| ·引物 | 第28-29页 |
| ·有关试剂及溶液配置 | 第29-31页 |
| ·主要溶液 | 第29-31页 |
| ·主要培养基 | 第31页 |
| ·实验仪器 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-40页 |
| ·番茄幼苗的培养 | 第32页 |
| ·基因组DNA 提取 | 第32-35页 |
| ·高盐低pH 值法 | 第32页 |
| ·分步离心法 | 第32-33页 |
| ·SDS 法 | 第33页 |
| ·CTAB 法 | 第33-34页 |
| ·改良CTAB 法 | 第34页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第34-35页 |
| ·胶的制备 | 第34页 |
| ·点样 | 第34-35页 |
| ·电泳 | 第35页 |
| ·染色 | 第35页 |
| ·观察 | 第35页 |
| ·目的基因的 PCR 扩增 | 第35-36页 |
| ·PCR 反应体系优化 | 第35页 |
| ·DNA 模板浓度 | 第35页 |
| ·引物用量 | 第35页 |
| ·Taq 酶 | 第35页 |
| ·PCR 扩增程序筛选 | 第35-36页 |
| ·PCR 扩增产物的凝胶电泳观察 | 第36页 |
| ·目的DNA 片段回收 | 第36-37页 |
| ·扩增产物的克隆 | 第37页 |
| ·感受态E.coli DH5α细胞的制备 | 第37页 |
| ·E.coli DH5α的转化 | 第37-38页 |
| ·重组子的筛选与鉴定 | 第38-40页 |
| ·β-半乳糖苷基因插入失活筛选 | 第38页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒DNA | 第38-39页 |
| ·滞后质粒筛选 | 第39页 |
| ·重组子的PCR 鉴定 | 第39页 |
| ·重组子的HindⅢ、BamHⅠ双酶切鉴定 | 第39-40页 |
| ·重组子阳性克隆菌保存 | 第40页 |
| ·实验结果及分析 | 第40-44页 |
| ·基因组DNA 提取方法比较 | 第40-41页 |
| ·PCR 反应体系优化结果 | 第41-42页 |
| ·PCR 产物回收 | 第42页 |
| ·重组子滞后质粒筛选 | 第42-43页 |
| ·滞后质粒PCR 鉴定 | 第43页 |
| ·滞后质粒双酶切鉴定 | 第43-44页 |
| ·测序及序列分析结果 | 第44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| ·启动子的选择 | 第44-46页 |
| ·β-半乳糖苷基因插入失活的蓝白菌落筛选 | 第46页 |
| 2 反义多聚半乳糖醛酸酶 PG 基因的克隆 | 第46-69页 |
| ·技术路线 | 第46页 |
| ·试验材料 | 第46-49页 |
| ·试验材料 | 第46页 |
| ·试剂 | 第46-47页 |
| ·质粒 | 第47页 |
| ·菌株 | 第47页 |
| ·引物 | 第47页 |
| ·有关试剂及溶液配置 | 第47-49页 |
| ·主要溶液 | 第47-49页 |
| ·主要培养基 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-55页 |
| ·创造无RNase 的环境 | 第49-50页 |
| ·材料的选取 | 第50页 |
| ·植物总RNA 的提取 | 第50-51页 |
| ·way1:Trizol 法 | 第50页 |
| ·way2:改良Trizol 法1 | 第50-51页 |
| ·way3:改良Trizol 法2 | 第51页 |
| ·RNA 的纯度、浓度和完整性的检测 | 第51-52页 |
| ·胶的制备 | 第51-52页 |
| ·预电泳，点样 | 第52页 |
| ·电泳 | 第52页 |
| ·染色 | 第52页 |
| ·观察 | 第52页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第52-53页 |
| ·以总RNA 为模板，Oligo(dT)15 为引物合成cDNA 第一链.. | 第52-53页 |
| ·以总RNA 为模板，随机引物为引物合成cDNA 第一链 | 第53页 |
| ·cDNA 第二链的合成即RT-PCR 扩增 | 第53页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第53-54页 |
| ·扩增产物的克隆 | 第54页 |
| ·感受态细胞的制备: | 第54页 |
| ·转化及鉴定: | 第54-55页 |
| ·重组子的筛选 | 第55页 |
| ·结果与分析 | 第55-62页 |
| ·桃成熟果实果肉总RNA 提取体系的建立 | 第55-58页 |
| ·不同方法对总RNA 提取效果的影响 | 第55-57页 |
| ·桃果肉用量对总RNA 提取的影响 | 第57-58页 |
| ·桃子果肉总RNA 提取结果 | 第58-59页 |
| ·反转录即cDNA 第一链的合成 | 第59页 |
| ·cDNA 第二条链的合成，即RT-PCR | 第59-60页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第60页 |
| ·重组子滞后质粒筛选 | 第60-61页 |
| ·滞后质粒PCR 鉴定 | 第61页 |
| ·滞后质粒双酶切鉴定 | 第61-62页 |
| ·测序及序列分析结果 | 第62页 |
| ·讨论 | 第62-69页 |
| ·桃总RNA 的提取 | 第62-64页 |
| ·防止RNA 降解的策略 | 第64页 |
| ·关于桃cDNA 合成方法 | 第64-66页 |
| ·反转录 | 第64-65页 |
| ·基因克隆的策略 | 第65-66页 |
| ·PG 基因的选择 | 第66-67页 |
| ·应用反义技术 | 第67-69页 |
| Ⅳ 结论 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 作者简介 | 第78-79页 |
| 导师简介 | 第79-80页 |