| 中文摘要 | 第1-15页 |
| ABSTRACT | 第15-26页 |
| 第一部分 人β_3-AR 真核表达质粒pcDNA3.1(+)-β_3-AR 的构建及表达 | 第26-47页 |
| 1 材料 | 第26-28页 |
| ·细胞与质粒 | 第26-27页 |
| ·药品与试剂 | 第27页 |
| ·实验仪器 | 第27-28页 |
| 2 方法 | 第28-37页 |
| ·PCR 引物设计 | 第28页 |
| ·PCR 反应 | 第28-29页 |
| ·胶回收纯化目的基因cDNA | 第29-30页 |
| ·目的基因cDNA 的测序鉴定 | 第30页 |
| ·载体与目的DNA 的双酶切 | 第30页 |
| ·目的基因 cDNA 与载体片段的连接 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备(CaCl_2法) | 第31页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 | 第31-32页 |
| ·质粒抽提 | 第32-33页 |
| ·重组表达质粒的双酶切及测序鉴定 | 第33-34页 |
| ·pcDNA3.1(+)-β_3-AR 真核表达质粒构建流程图（如图1-1） | 第34页 |
| ·重组表达质粒瞬时转染HEK293 细胞 | 第34-35页 |
| ·RT-PCR 分析外源基因的表达 | 第35-37页 |
| ·免疫细胞化学鉴定β_3-AR 蛋白表达 | 第37页 |
| 3 结果 | 第37-38页 |
| ·β_3-AR 的PCR 扩增 | 第37-38页 |
| ·真核表达质粒pcDNA3.1(+)-β_3-AR 的构建及鉴定 | 第38页 |
| ·β_3-AR 基因在HEK293 细胞中的表达 | 第38页 |
| ·HEK293 细胞免疫细胞化学鉴定β_3-AR 表达结果 | 第38页 |
| 4 讨论 | 第38-44页 |
| 5 参考文献 | 第44-47页 |
| 第二部分稳定转染人β_1，β_2 和β_3-AR 基因细胞株的鉴定 | 第47-70页 |
| 1 材料 | 第48-49页 |
| ·细胞来源 | 第48页 |
| ·主要试剂与材料 | 第48页 |
| ·主要实验仪器 | 第48-49页 |
| 2 方法 | 第49-54页 |
| ·溶液配制 | 第49页 |
| ·细胞培养 | 第49页 |
| ·免疫细胞化学 | 第49-50页 |
| ·免疫荧光检测 | 第50页 |
| ·Western Blotting 检测受体蛋白的表达 | 第50-53页 |
| ·放射性配体结合实验验证β-CHO 细胞中靶受体蛋白的表达 | 第53-54页 |
| 3 结果 | 第54-57页 |
| ·β1-CHO，β_2-CHO 和β_3-CHO 细胞中靶受体蛋白的免疫细胞化学鉴定 | 第54-55页 |
| ·β_1-CHO，β_2-CHO 和β_3-CHO 细胞中靶受体蛋白的免疫荧光鉴定 | 第55页 |
| ·Western Blotting 鉴定受体蛋白表达 | 第55页 |
| ·放射性配体结合实验验证β-CHO 细胞中靶受体蛋白的表达 | 第55-57页 |
| 4 讨论 | 第57-67页 |
| 5 参考文献 | 第67-70页 |
| 第三部分 基于双荧光素酶报告基因检测的β_3-AR 激动剂筛选模型的建立及其活性化合物的筛选 | 第70-82页 |
| 前言 | 第70页 |
| 1 材料 | 第70-71页 |
| ·细胞与质粒 | 第70-71页 |
| ·药品与试剂 | 第71页 |
| ·实验仪器 | 第71页 |
| 2 方法 | 第71-73页 |
| ·荧光素酶报告基因质粒瞬时转染β_3-CHO 细胞 | 第71-72页 |
| ·异丙肾上腺素对荧光素酶报告基因的诱导表达 | 第72页 |
| ·双荧光素酶报告基因活性检测 | 第72-73页 |
| ·新化合物的β_3-AR 激动活性筛选 | 第73页 |
| ·统计学处理 | 第73页 |
| 3 结果 | 第73-77页 |
| ·异丙肾上腺素对荧光素酶报告基因活性的影响 | 第73-74页 |
| ·新化合物对荧光素酶报告基因活性的影响 | 第74-77页 |
| 4 讨论 | 第77-80页 |
| 5 参考文献 | 第80-82页 |
| 第四部分 SW872 前脂肪细胞的分化诱导与胰岛素抵抗模型的建立 | 第82-99页 |
| 前言 | 第82页 |
| 1 材料 | 第82-83页 |
| ·细胞株来源 | 第82页 |
| ·药品与试剂 | 第82-83页 |
| ·主要实验仪器 | 第83页 |
| 2 方法 | 第83-85页 |
| ·SW872 前脂肪细胞的培养 | 第83页 |
| ·SW872 前脂肪细胞中β-AR 的免疫细胞化学鉴定 | 第83-84页 |
| ·SW872 前脂肪细胞的诱导分化与油红O 染色鉴定 | 第84页 |
| ·SW872 脂肪细胞胰岛素抵抗细胞模型的建立 | 第84页 |
| ·统计学处理 | 第84-85页 |
| 3 结果 | 第85-88页 |
| ·SW872 前脂肪细胞的诱导分化与鉴定 | 第85页 |
| ·SW872 前脂肪细胞中β_1-AR，β_2-AR 和β_3-AR 的免疫细胞化学鉴定 | 第85页 |
| ·地塞米松诱导SW872 脂肪细胞胰岛素抵抗细胞模型的建立 | 第85-88页 |
| 4 讨论 | 第88-95页 |
| 5 参考文献 | 第95-99页 |
| 第五部分 苯乙醇胺类衍生物BETAPHRINE 的体外药理作用研究 | 第99-115页 |
| 前言 | 第99页 |
| 1 材料 | 第99-101页 |
| ·细胞与质粒 | 第99页 |
| ·药品与试剂 | 第99-100页 |
| ·主要实验仪器 | 第100-101页 |
| 2 方法 | 第101-103页 |
| ·SW872 前脂肪细胞培养（同第四部分） | 第101页 |
| ·Betaphrine 对 SW872 前脂肪细胞分化过程中脂肪积聚的影 响 | 第101页 |
| ·MTT 法测定SW872 前脂肪细胞的增殖 | 第101页 |
| ·Betaphrine 对SW872 脂肪细胞胰岛素抵抗模型的影响 | 第101-102页 |
| ·荧光素酶报告基因质粒瞬时转染β_3-CHO 细胞及药物处理 | 第102页 |
| ·双荧光素酶报告基因活性检测 | 第102页 |
| ·统计学处理 | 第102-103页 |
| 3 结果 | 第103-110页 |
| ·Betaphrine 对SW872 前脂肪细胞增殖的影响 | 第103-104页 |
| ·Betaphrine 对SW872 前脂肪细胞分化过程中脂肪积聚的影响 | 第104-105页 |
| ·Betaphrine 对SW872 脂肪细胞胰岛素抵抗模型糖代谢的影响 | 第105-108页 |
| ·Betaphrine 对荧光素酶报告基因活性的影响 | 第108-110页 |
| 4 讨论 | 第110-113页 |
| 5 参考文献 | 第113-115页 |
| 全文总结 | 第115-117页 |
| 论文的创新性与今后的研究方向 | 第117-118页 |
| 文献综述一 | 第118-132页 |
| 文献综述二 | 第132-141页 |
| 致谢 | 第141-143页 |
| 攻读博士学位期间所取得的学术成果 | 第143-144页 |
