| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-27页 |
| 1 几丁质及其几丁质酶研究 | 第11-25页 |
| ·几丁质及其衍生物简介 | 第11-12页 |
| ·几丁质酶的研究概况 | 第12页 |
| ·几丁质酶的分布和生理意义 | 第12-13页 |
| ·几丁质酶的克隆与分类 | 第13-14页 |
| ·微生物几丁质酶的特点 | 第14页 |
| ·几丁质酶的理化性质 | 第14-15页 |
| ·微生物几丁质酶基因的结构 | 第15-19页 |
| ·几丁质酶催化作用机理 | 第19-20页 |
| ·几丁质酶的应用 | 第20-21页 |
| ·微生物几丁质降解系统的研究概况 | 第21-25页 |
| 2. 本论文的研究目的及意义 | 第25-27页 |
| 第二章 豚鼠气单胞菌 CB101 基因组 Cosmid 文库的构建和研究 | 第27-54页 |
| 1 材料 | 第27-33页 |
| ·菌种与质粒 | 第27-28页 |
| ·主要试剂 | 第28页 |
| ·工具酶 | 第28页 |
| ·试剂盒 | 第28页 |
| ·主要仪器 | 第28-29页 |
| ·工具软件 | 第29页 |
| ·常用溶液、培养基的配制 | 第29-33页 |
| 2. 方法 | 第33-46页 |
| ·胶体几丁质的制备 | 第33页 |
| ·Cosmid 文库的构建 | 第33-41页 |
| ·质粒提取 | 第41-42页 |
| ·几丁质酶的筛选 | 第42页 |
| ·PCR 验证阳性克隆子 | 第42页 |
| ·酶切反应体系 | 第42-43页 |
| ·southern blotting | 第43-45页 |
| ·几丁质酶活力检测 | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-51页 |
| ·构建CB101 基因组cosmid 文库并对文库进行评估 | 第46页 |
| ·从文库中筛选几丁质酶及PCR 初步验证 | 第46-48页 |
| ·Southern blotting 验证基因这9 个克隆子都包含基因chi1 | 第48-49页 |
| ·Southern blotting 验证基因chi1 在CB101 染色体基因组上是单拷贝 | 第49-50页 |
| ·测定CB101△chi1 的酶活 | 第50-51页 |
| 4 讨论与小结 | 第51-54页 |
| 第三章 豚鼠气单胞菌 CB101 分泌的不同分子量的几丁质酶的分离、纯化 | 第54-61页 |
| 1. 材料 | 第54页 |
| ·菌株 | 第54页 |
| ·培养基、试剂及主要仪器 | 第54页 |
| 2. 方法 | 第54-56页 |
| ·质粒检测、回收 | 第54页 |
| ·蛋白凝胶电泳与几丁质酶活性染色 | 第54-55页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第55页 |
| ·酶活力检测：见第二章“方法2.8” | 第55页 |
| ·酶的分离和纯化 | 第55页 |
| ·SDS-PAGE 电泳及电转移 | 第55页 |
| ·蛋白 N -端氨基酸序列的测定 | 第55-56页 |
| 3 结果与分析 | 第56-59页 |
| ·DEAE-纤维素柱层析 | 第56-57页 |
| ·Mono Q 阴离子交换柱层析 | 第57-58页 |
| ·几丁质酶分离与纯化 | 第58-59页 |
| ·纯化蛋白鉴定 | 第59页 |
| 4.讨论与小结 | 第59-61页 |
| 第四章 总结与展望 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 缩写词 | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
