| 中文摘要 | 第1-17页 |
| ABSTRACT | 第17-23页 |
| 符号说明 | 第23-25页 |
| 前言 | 第25-37页 |
| 第一章 前列腺非雄激素依赖启动子介导的ODC、AdoMetDC双反义RNA表达载体的构建 | 第37-65页 |
| 1.材料 | 第38-40页 |
| ·质粒、菌株 | 第38页 |
| ·细胞 | 第38页 |
| ·引物的设计与合成 | 第38-39页 |
| ·试剂 | 第39-40页 |
| ·主要实验仪器 | 第40页 |
| 2.方法 | 第40-54页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第40-42页 |
| ·pMD-AdoMetDC-ODC的构建 | 第42-43页 |
| ·pAdTrack-AdoMetDC-ODC的构建 | 第43-44页 |
| ·pAdTrack-PPA8-AdoMetDC-ODC穿梭载体的构建 | 第44-45页 |
| ·pShuttle-EGFP-Basic-PPA8-AdoMetDC-ODC的构建 | 第45-47页 |
| ·pShuttle-Basic-PPA8-AdoMetDC-ODC-PolyA的构建 | 第47-49页 |
| ·pADxsi-PPA8-AdoMetDC-ODC-PolyA的构建 | 第49-50页 |
| ·重组腺病毒载体Ad-PPA8-AdoMetDC-ODCas的包装和扩增 | 第50-54页 |
| 3.结果 | 第54-63页 |
| ·PCR扩增目的基因的鉴定 | 第54-55页 |
| ·pMD-AdoMetDC-ODC的鉴定 | 第55页 |
| ·pAdTrack-AdoMetDC-ODC的鉴定 | 第55-56页 |
| ·pAdTrack-PPA8-AdoMetDC-ODC穿梭载体的鉴定 | 第56-57页 |
| ·pShuttle-EGFP-Basic-PPA8-AdoMetDC-ODC的鉴定 | 第57-58页 |
| ·pShuttle-Basic-PPA8-AdoMetDC-ODC-PolyA的鉴定 | 第58-60页 |
| ·pADxsi-PPA8-AdoMetDC-ODC-PolyA的鉴定 | 第60页 |
| ·腺病毒的包装扩增及滴度测定 | 第60-62页 |
| ·重组腺病毒的PCR鉴定 | 第62-63页 |
| 4.讨论 | 第63-65页 |
| 第二章 前列腺雄激素依赖启动子介导的ODC、AdoMetDC双反义RNA表达载体的构建 | 第65-88页 |
| 1.材料 | 第65-68页 |
| ·质粒、菌株 | 第65-66页 |
| ·细胞 | 第66页 |
| ·引物的设计与合成 | 第66页 |
| ·试剂 | 第66-67页 |
| ·主要实验仪器 | 第67-68页 |
| 2.方法: | 第68-79页 |
| ·pShuttle-Basic-AdoMetDC-ODC的构建 | 第68-69页 |
| ·pShuttle-Basic-P61-AdoMetDC-ODC的构建 | 第69-71页 |
| ·pShuttle-Basic-P61-AdoMetDC-ODC-PolyA的构建 | 第71-74页 |
| ·pADxsi-P61-AdoMetDC-ODC-PolyA的构建 | 第74-76页 |
| ·重组腺病毒载体Ad-P61-AdoMetDC-ODC-PolyAas的包装和扩增 | 第76-79页 |
| 3 结果 | 第79-85页 |
| ·pShuttle-Basic-AdoMetDC-ODC的鉴定 | 第79-80页 |
| ·pShuttle-Basic-P61-AdoMetDC-ODC的鉴定 | 第80-81页 |
| ·pShuttle-Basic-P61-AdoMetDC-ODC-PolyA穿梭载体的鉴定 | 第81-82页 |
| ·pAdxsi-P61-AdoMetDC-ODC-PolyA的鉴定 | 第82-84页 |
| ·腺病毒的包装扩增及滴度测定 | 第84-85页 |
| 4.讨论 | 第85-88页 |
| 第三章 重组腺病毒抑癌作用的体外研究 | 第88-124页 |
| 1.材料 | 第88-91页 |
| ·细胞 | 第88-89页 |
| ·腺病毒 | 第89页 |
| ·引物的设计与合成 | 第89页 |
| ·试剂 | 第89-91页 |
| ·设备 | 第91页 |
| 2.方法 | 第91-101页 |
| ·最适MOI值确定 | 第91-92页 |
| ·RNA提取 | 第92-93页 |
| ·RT-PCR | 第93-94页 |
| ·ODC,AdoMetDC和p21蛋白的Western Blot检测 | 第94-97页 |
| ·细胞内多胺含量的测定 | 第97页 |
| ·MTT | 第97-98页 |
| ·多胺恢复实验 | 第98-99页 |
| ·细胞周期的检测 | 第99-100页 |
| ·基底膜侵袭实验 | 第100-101页 |
| 3.结果 | 第101-120页 |
| ·最适MOI值确定 | 第101-102页 |
| ·RNA提取 | 第102页 |
| ·RT-PCR | 第102-103页 |
| ·腺病毒对ODC和AdoMetDC表达的影响,以及对p21 WAF1/CIP1/SDI1(p21)蛋白表达的影响 | 第103-105页 |
| ·腺病毒对细胞内多胺含量的影响 | 第105-106页 |
| ·腺病毒对大肠癌细胞增殖的影响 | 第106-108页 |
| ·腺病毒对细胞周期影响 | 第108-116页 |
| ·重组腺病毒对前列腺癌细胞体外侵袭能力的影响 | 第116-120页 |
| 4.讨论 | 第120-124页 |
| 第四章 重组腺病毒对前列腺癌细胞生长抑制作用的体内研究 | 第124-132页 |
| 1.材料与方法 | 第124-126页 |
| ·材料 | 第124-125页 |
| ·方法 | 第125-126页 |
| 2.结果 | 第126-129页 |
| ·重组腺病毒Ad-P61-AdoMetDC-ODC和Ad-PPA8-AdoMetDC-ODCas在裸鼠移植瘤模型中具有抑制肿瘤形成的作用 | 第126-127页 |
| ·重组腺病毒Ad-P61-AdoMetDC-ODC和Ad-PPA8-AdoMetDC-ODCas可减缓已形成的裸鼠前列腺癌移植瘤的生长 | 第127-129页 |
| 3.讨论 | 第129-132页 |
| 附录表 | 第132-135页 |
| 参考文献 | 第135-146页 |
| 致谢 | 第146-147页 |
| 攻读博士学位期间所发表的论文和著作 | 第147-148页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第148-149页 |
| 附件 | 第149-197页 |
