| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 一 文献综述 | 第11-29页 |
| 1 植物病毒表达载体 | 第11-21页 |
| ·植物病毒表达载体的构建策略 | 第11-14页 |
| ·基因置换策略 | 第11-12页 |
| ·基因插入策略 | 第12-13页 |
| ·抗原展示系统 | 第13页 |
| ·基因互补型载体 | 第13-14页 |
| ·多肽表达系统 | 第14页 |
| ·植物病毒载体的接种方式 | 第14-15页 |
| ·植物病毒表达载体的优缺点 | 第15-17页 |
| ·植物病毒表达载体系统的优点 | 第15-16页 |
| ·植物病毒表达载体系统的缺陷 | 第16-17页 |
| ·植物病毒载体的应用前景 | 第17页 |
| ·马铃薯X病毒表达载体 | 第17-21页 |
| ·病毒基因组的结构与功能 | 第17-18页 |
| ·病毒的复制、表达及其调控 | 第18-20页 |
| ·系统侵染 | 第20页 |
| ·PVX作为表达载体的应用 | 第20-21页 |
| 2 乙肝病毒表面抗原 | 第21-29页 |
| ·HBV的结构 | 第22-23页 |
| ·preS蛋白与HBsAg的免疫原性 | 第23-24页 |
| ·HBV疫苗研究进展 | 第24-29页 |
| ·利用微生物工程生产HBsAg蛋白 | 第24-25页 |
| ·大肠杆菌系统表达的乙肝疫苗 | 第24页 |
| ·病毒系统表达的乙肝疫苗 | 第24-25页 |
| ·酵母系统表达的乙肝疫苗 | 第25页 |
| ·利用哺乳动物基因工程生产HBsAg蛋白 | 第25-26页 |
| ·利用植物基因工程生产HBsAg蛋白 | 第26-29页 |
| 二 材料与方法 | 第29-42页 |
| 1 材料和试剂 | 第29页 |
| ·植物材料和菌株 | 第29页 |
| ·酶和生化试剂 | 第29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| 2 方法 | 第29-42页 |
| ·引物设计 | 第29-30页 |
| ·Gus引物设计 | 第30页 |
| ·HBsAg引物设计 | 第30页 |
| ·基因的克隆 | 第30-31页 |
| ·PCR 扩增Gus 基因 | 第30-31页 |
| ·PCR 扩增HBsAg 基因 | 第31页 |
| ·PCR 产物回收 | 第31页 |
| ·克隆载体的构建及鉴定 | 第31-34页 |
| ·PCR 回收产物与克隆载体pGEMT-Easy Vector 的连接 | 第31-32页 |
| ·E. coli DH5α感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第32页 |
| ·重组质粒的提取 | 第32-33页 |
| ·重组质粒的pcr 鉴定 | 第33页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第33页 |
| ·重组质粒的序列分析 | 第33-34页 |
| ·PVX表达载体的构建及鉴定 | 第34-36页 |
| ·Gus/HBsAg 基因的获取 | 第34-35页 |
| ·Gus/HBsAg 质粒的提取 | 第34页 |
| ·Gus/HBsAg 质粒的纯化 | 第34-35页 |
| ·Gus/HBsAg 质粒的酶切 | 第35页 |
| ·Gus/HBsAg 基因的回收 | 第35页 |
| ·PVX 表达载体的构建 | 第35页 |
| ·Gus/HBsAg 基因与PVX表达载体的连接 | 第35页 |
| ·连接产物的转化及鉴定 | 第35-36页 |
| ·重组农杆菌工程菌株的获得及鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组质粒的获取 | 第36页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第36页 |
| ·农杆菌的转化（电激转化法） | 第36-37页 |
| ·筛选与鉴定 | 第37页 |
| ·本生烟草的侵染 | 第37页 |
| ·菌液准备 | 第37页 |
| ·注射渗透法侵染植株 | 第37页 |
| ·报告基因GUS的组织化学检测 | 第37-38页 |
| ·蛋白样品的ELISA分析 | 第38-39页 |
| ·提取植物蛋白 | 第38页 |
| ·时间分辨荧光免疫法定量试剂盒检测HBsAg | 第38-39页 |
| ·试剂准备 | 第38页 |
| ·试验操作 | 第38页 |
| ·仪器检测 | 第38-39页 |
| ·Bradford蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白含量 | 第39页 |
| ·HBsAg蛋白的SDS-PAGE分析 | 第39-40页 |
| ·按说明书安装电泳玻璃板 | 第39页 |
| ·制胶 | 第39页 |
| ·上样 | 第39-40页 |
| ·电泳 | 第40页 |
| ·银染法检定蛋白质纯度 | 第40页 |
| ·HBsAg蛋白的Western Blot分析 | 第40-42页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第40页 |
| ·电转移 | 第40-41页 |
| ·封闭 | 第41页 |
| ·免疫反应 | 第41页 |
| ·HRP-DAB底物显色试剂盒检测显色反应 | 第41-42页 |
| 三 结果与分析 | 第42-49页 |
| 1 Gus基因的扩增 | 第42页 |
| 2 HBsAg基因的扩增 | 第42页 |
| 3 PVX表达载体的构建 | 第42-43页 |
| 4 PVX表达载体的鉴定 | 第43-44页 |
| 5 重组农杆菌的鉴定 | 第44页 |
| 6 报告基因(GUS)的检测 | 第44-45页 |
| 7 外源基因表达的ELISA检测 | 第45-48页 |
| 8 重组蛋白的SDS-PAGE（银染法染色）分析 | 第48页 |
| 9 外源基因表达的Western blot分析 | 第48-49页 |
| 四 讨论 | 第49-53页 |
| 1 马铃薯X病毒表达载体表达体系的研究 | 第49-50页 |
| 2 马铃薯X病毒表达载体在疫苗研制中的应用 | 第50-51页 |
| 3 马铃薯X病毒表达载体在基因功能研究中的应用 | 第51-53页 |
| 五 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 缩略词 | 第59-60页 |
| 附图 | 第60-62页 |
| 附录 | 第62-65页 |
| 致谢 | 第65页 |