| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-14页 |
| 缩略语表 | 第14-15页 |
| 第一章 研究背景与研究目标 | 第15-47页 |
| 1. RNA 干扰的发现、机制及研究进展 | 第16-27页 |
| ·RNA 干扰早期研究 | 第16页 |
| ·RNA 干扰的理论形成 | 第16-17页 |
| ·RNA 干扰可能的机制 | 第17-19页 |
| ·RNA 干扰在线虫、果蝇及哺乳动物中的研究 | 第19-24页 |
| ·线虫 | 第19-20页 |
| ·果蝇 | 第20-23页 |
| ·哺乳动物 | 第23-24页 |
| ·RNA 干扰在斑马鱼中的研究 | 第24-27页 |
| 2. RNA 干扰的应用策略 | 第27-34页 |
| ·dsRNA 及siRNA 的制备 | 第27-31页 |
| ·启动子的选择 | 第31-33页 |
| ·载体构建 | 第33-34页 |
| 3. RNA 干扰的功能及应用 | 第34-37页 |
| ·RNA 干扰在生物体内的功能 | 第34-35页 |
| ·RNA 干扰的应用 | 第35-37页 |
| 4. RNA 干扰与甲基化的关系 | 第37-44页 |
| ·RNA 指导的DNA 甲基化 | 第38-41页 |
| ·siRNA 参与异染色质的形成 | 第41-44页 |
| 5. 研究目标 | 第44-45页 |
| 6. 技术路线 | 第45-47页 |
| 第二章 斑马鱼H1与U6启动子的克隆及转录活性分析 | 第47-57页 |
| 1. 材料与方法 | 第48-49页 |
| ·数据库搜索，比较与引物设计 | 第48页 |
| ·斑马鱼DNA 的提取 | 第48-49页 |
| ·斑马鱼 H1、U6 启动子的 PCR 扩增及测序验证 | 第49页 |
| ·载体构建 | 第49页 |
| ·斑马鱼和显微注射 | 第49页 |
| 2. 结果 | 第49-54页 |
| ·斑马鱼H1、U6 启动子序列对比 | 第49-52页 |
| ·斑马鱼H1、U6 启动子的克隆与测序 | 第52-53页 |
| ·斑马鱼H1、U6 启动子的转录活性分析 | 第53-54页 |
| 3. 讨论 | 第54-57页 |
| 第三章 斑马鱼 H1、U6 启动子驱动的shRNA 载体在RNAi 中的应用 | 第57-77页 |
| 1. 材料与方法 | 第57-66页 |
| ·实验材料 | 第57-58页 |
| ·鲤鱼细胞 | 第57-58页 |
| ·斑马鱼 | 第58页 |
| ·shGFP，shNTL 载体的构建 | 第58-60页 |
| ·pGL3-Control-NTL 载体的构建 | 第60页 |
| ·鲤鱼细胞转染 | 第60-62页 |
| ·shRNA 载体在斑马鱼胚胎中的注射 | 第62页 |
| ·荧光定量RT-PCR | 第62-63页 |
| ·胚胎整体原位杂交 | 第63-65页 |
| ·内源基因Chd，Bmp26 siRNA 位点的确定及载体构建 | 第65页 |
| ·转pZH1/U6Ni 斑马鱼性腺整合个体的筛选及shNTL 的检测 | 第65-66页 |
| 2. 结果 | 第66-75页 |
| ·shRNA 载体的构建 | 第66页 |
| ·鲤鱼细胞中shRNA 载体的抑制效率 | 第66-69页 |
| ·斑马鱼胚胎中shRNA 载体的抑制效率 | 第69-72页 |
| ·Chordin，Bmp26 siRNA 位点的确定 | 第72-73页 |
| ·LNA 检测转pZU6Ni F2 代胚胎中shNTL 的表达情况 | 第73-75页 |
| 3. 讨论 | 第75-77页 |
| 第四章 T7系统应用到RNA干扰中所用载体的构建与验证 | 第77-89页 |
| 1. 材料与方法 | 第78-82页 |
| ·载体构建 | 第78-81页 |
| ·显微注射，养殖，筛选性腺整合个体 | 第81-82页 |
| ·T7 RNA 聚合酶的表达及功能验证 | 第82页 |
| ·pT7 shRNA 体内转录的验证 | 第82页 |
| 2. 结果 | 第82-87页 |
| ·载体pCMV T7R，pT75hRNA，pT78mp26 的构建 | 第82-83页 |
| ·转pCMV T7R 个体的养殖与筛选 | 第83页 |
| ·转pCMV T7R F3代胚胎表达T7 RNA聚合酶的验证 | 第83-86页 |
| ·pT75hRNA 载体体内转录验证 | 第86-87页 |
| 3. 讨论 | 第87-89页 |
| 第五章 T7系统在RNA干扰中的应用 | 第89-99页 |
| 1. 材料与方法 | 第89-91页 |
| ·实验鱼 | 第89-90页 |
| ·显微注射 | 第90页 |
| ·荧光定量 RT-PCR | 第90-91页 |
| ·整体原位杂交 | 第91页 |
| 2. 结果 | 第91-96页 |
| ·pT75hGFP 载体对 GFP 的抑制 | 第91页 |
| ·荧光强度观察 | 第91页 |
| ·荧光定量RT-PCR 分析 | 第91页 |
| ·化学合成siGFP对GFP的抑制 | 第91-93页 |
| ·shNTL 载体对NTL 的抑制 | 第93-96页 |
| ·载体pT7 shNTL 在F3 代胚胎中的效果 | 第93-95页 |
| ·载体pCMVT7R shNTL 在野生型胚胎中的效果 | 第95-96页 |
| 3. 讨论 | 第96-99页 |
| 第六章 总结与展望 | 第99-102页 |
| 1. 本研究取得的主要进展 | 第99-100页 |
| 2. 值得深入研究的问题 | 第100-101页 |
| 3. 本论文的创新点 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-115页 |
| 附录 | 第115-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
