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棉花耐盐基因GhNHX1启动子的克隆及功能分析

中文摘要第1-11页
英文摘要第11-13页
1 引言第13-39页
   ·植物启动子的核心结构及其功能第13-15页
     ·转录起始位点第13-14页
     ·TATA-box第14页
     ·CAAT-box第14-15页
     ·GC-box第15页
   ·组成型启动子第15-17页
     ·Act1启动子第15-16页
     ·CaMV35S 启动子第16-17页
     ·Ubiquitin 启动子第17页
   ·诱导型启动子第17-27页
     ·盐诱导启动子第18-19页
     ·重金属诱导启动子第19-20页
     ·Ca~(2+)诱导型启动子第20-21页
     ·氮诱导型启动子第21页
     ·植物激素诱导启动子第21-27页
     ·低温诱导启动子第27页
   ·组织特异性启动子第27-34页
     ·根特异启动子第28-29页
     ·维管束特异表达启动子第29-30页
     ·叶片表达启动子第30-31页
     ·果实特异表达启动子第31-32页
     ·种子特异表达启动子第32-34页
   ·植物的耐盐机制与液泡型 Na~+/H~+逆向运转体第34-37页
     ·植物的盐胁迫适应机制第34-35页
     ·SOS 信号途径与植物耐盐第35-36页
     ·液泡型 Na+/H+逆向运转体与 Na+的区隔化第36-37页
   ·本研究的目的意义第37-39页
2 材料与方法第39-55页
   ·实验材料第39-40页
     ·植物材料第39页
     ·菌株与质粒第39页
     ·酶与各种生化试剂第39页
     ·实验用的引物第39-40页
   ·实验方法第40-55页
     ·植物基因组总 DNA 提取第40-41页
     ·植物基因组 DNA 的纯化第41页
     ·GhNHX1 启动子的分离-TAIL-PCR第41-43页
     ·DNA 片段与克隆载体的连接第43-44页
     ·大肠杆菌 DH5α感受态的制备第44页
     ·大肠杆菌细胞的转化第44页
     ·电泳凝胶中 DNA 片段的回收第44-45页
     ·克隆载体的酶切鉴定第45页
     ·序列的测定第45-46页
     ·质粒 DNA 的提取第46-47页
     ·根癌农杆菌 LBA4404 感受态细胞的制备第47页
     ·冻融法转化农杆菌第47页
     ·农杆菌介导的烟草悬浮细胞的转化第47-48页
     ·农杆菌介导的烟草的转化第48页
     ·GUS 活性的组织化学分析第48-49页
     ·GUS 基因表达的定量分析第49-50页
     ·植物核蛋白的提取第50-51页
     ·EMSA 探针的标记第51-52页
     ·EMSA 探针的纯化第52页
     ·制备聚丙烯酰胺凝胶第52-53页
     ·DNA 探针与蛋白质的结合第53页
     ·电泳、放射自显影第53页
     ·启动子活性的瞬时表达分析第53-55页
3 结果与分析第55-70页
   ·GhNHX1 启动子的分离第55-58页
   ·利用internet 工具进行 GhNHX1 启动子功能预测第58-60页
   ·GhNHX1 启动子的 GUS 活性检测第60-62页
   ·GhNHX1 启动子缺失分析第62-65页
   ·GhNHX1 启动子-52/-25 区段活性分析第65-66页
   ·Region I 和核蛋白的体外结合实验-EMSA第66-67页
   ·GhNHX1 启动子响应渗透胁迫、LiCl 和 ABA 的诱导第67-68页
   ·GhNHX1 启动子的组织表达模式第68-70页
4 讨论第70-74页
   ·GhNHX1 启动子是一个受盐胁迫诱导的强启动子第70页
   ·GhNHX1 启动子较长片断活性较低的问题第70-71页
   ·响应盐胁迫信号的顺式作用元件位于GhNHX1启动子 的-52/-25区域第71-72页
   ·TAIL-PCR 方法用与扩增启动子第72页
   ·研究启动子的一般策略第72-74页
5 结论第74-75页
参考文献第75-92页
附录第92-96页
致谢第96页

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