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菲降解菌分离鉴定、降解基因克隆与表达及菲跨膜作用研究

摘要第1-8页
Abstract第8-15页
第1章 前言第15-37页
   ·持久性有机污染物研究概述第15-22页
     ·POPs研究概述第15-16页
     ·典型POPs-PAHs的概述第16-22页
       ·PAHs的来源与分布及归趋第17-21页
       ·PAHs的累积和生物毒性第21-22页
   ·PAHs微生物降解概述第22-28页
     ·PAHs降解菌的筛选第22-23页
     ·PAHs的微生物代谢途径第23-28页
       ·PAHs的微生物共代谢作用第23-24页
       ·影响PAHs微生物降解的因素第24-25页
       ·菲的细菌代谢途径第25-28页
   ·菲降解细菌的分子生物学研究综述第28-35页
     ·菲的微生物降解酶系及基因簇的研究第28-30页
     ·降解基因的进化第30-31页
     ·功能基因的克隆与表达第31-35页
       ·鞘鞍醇单胞菌属(Sphingomonas)菌株中菲降解相关基因的克隆第31页
       ·Pseudomonas putida OUS82中菲降解相关基因的克隆第31-32页
       ·Pseudomonas putida G7菌中相关降解基因的研究第32页
       ·Pseudomonas putida NCIB9816-4中降解质粒的研究第32页
       ·Nocardioides sp. KP7中菲降解基因的克隆第32-33页
       ·Burkholderia sp. RP007中菲降解基因的克隆第33页
       ·Mycobacterium vanbaalenii sp. PYR-1中菲降解基因的克隆第33-34页
       ·降解基因的表达及调节第34-35页
   ·有毒有机物跨膜研究进展第35-37页
第2章 菲降解菌株分离、鉴定及系统发育研究第37-53页
   ·材料与方法第37-42页
     ·试剂和仪器第37-38页
     ·材料与培养基第38页
     ·菲降解菌株分离与降解能力鉴定第38-39页
     ·菲降解菌株的鉴定及系统发育研究第39-42页
   ·结果与讨论第42-52页
     ·分离菌株的菲降解力第42-44页
     ·分离菌株的形态学研究第44-45页
     ·分离菌株的生理生化特征第45-46页
     ·分离菌株的抗生素敏感性第46-47页
     ·分离菌株的全细胞脂肪酸分析第47页
     ·G+Cmol%含量分析第47页
     ·分离菌株的碳源利用能力第47-48页
     ·分离菌株的16SrDNA序列分析第48-49页
     ·基于16SrDNA序列系统发育树的构建第49-52页
   ·小结第52-53页
第3章 菲降解菌株生长和降解特性研究第53-63页
   ·材料与方法第53-55页
     ·菲降解菌株生长条件研究第53-54页
     ·分离菌株降解特性研究第54-55页
     ·菲降解率的测定第55页
   ·结果与讨论第55-62页
     ·菲降解菌的生长条件第55-57页
     ·分离菌株的菲降解特性第57-62页
   ·小结第62-63页
第4章 菲降解菌对菲降解代谢途径研究第63-74页
   ·材料与方法第63-66页
     ·材料与试剂第63-64页
     ·仪器第64页
     ·降解途径中相关酶活性测定第64-65页
     ·代谢产物制备第65页
     ·代谢产物的鉴定和分析第65-66页
   ·结果与讨论第66-73页
     ·分离菌株的各种酶活测定第66页
     ·全细胞蛋白质电泳第66-67页
     ·降解产物的GC-MS分析第67-71页
     ·两菌株对菲降解途径的推断第71-73页
   ·小结第73-74页
第5章 菲降解菌芳香环羟化双加氧酶铁硫蛋白a亚基基因的克隆第74-83页
   ·材料与方法第74-78页
     ·材料第74页
     ·试剂第74-75页
     ·引物设计第75页
     ·基因组DNA提取第75页
     ·PCR扩增第75-76页
     ·PCR产物目的片断的割胶回收第76页
     ·连接第76-77页
     ·感受态细胞的制备与转化第77页
     ·序列测定与系统发育分析第77-78页
   ·结果与讨论第78-82页
     ·PCR扩增产物第78页
     ·阳性克隆子筛选与鉴定第78-79页
     ·目的基因的序列测定与分析第79-81页
     ·系统发育分析第81-82页
   ·小结第82-83页
第6章 菲降解菌邻苯二酚2,3-双加氧酶基因的克隆及定位第83-95页
   ·材料与方法第83-87页
     ·材料第83-84页
     ·试剂第84页
     ·引物设计第84页
     ·基因组DNA提取第84页
     ·PCR扩增第84-85页
     ·PCR产物目的片断的割胶回收第85页
     ·连接第85页
     ·感受态细胞的制备与转化第85-86页
     ·序列测定与系统发育分析第86-87页
   ·结果与讨论第87-94页
     ·PCR扩增产物第87页
     ·阳性克隆子筛选与鉴定第87-88页
     ·目的基因的序列测定第88-91页
     ·ZP2菌株的C230基因定位第91-93页
     ·系统发育分析第93-94页
   ·小结第94-95页
第7章 ZP2菌株邻苯二酚2,3-双加氧酶基因在大肠杆菌中高效表达第95-102页
   ·材料与方法第95-98页
     ·材料第95页
     ·试剂第95-96页
     ·引物分析第96页
     ·表达质粒的构建与转化第96-97页
     ·目的基因C230在大肠杆菌中诱导表达第97-98页
     ·重组蛋白的聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳第98页
     ·表达产物的活性分析第98页
   ·结果与讨论第98-100页
     ·重组表达载体的阳性克隆检测第98-99页
     ·重组表达载体的酶切鉴定结果第99页
     ·C230基因在大肠杆菌中的高效表达第99-100页
     ·表达产物C230酶活检测第100页
   ·小结第100-102页
第8章 PAHs菲在模拟细胞膜上的分配第102-115页
   ·材料与方法第102-106页
     ·材料第102-103页
     ·仪器第103页
     ·单层膦脂膜(SPM)的制备第103-104页
     ·SPM表征第104页
     ·标准曲线绘制第104页
     ·SPM分配实验第104-105页
     ·影响因子实验第105页
       ·离子强度的影响实验第105页
       ·pH的影响实验第105页
       ·温度的影响实验第105页
     ·菲在SPM上的反分配实验第105-106页
   ·结果与讨论第106-114页
     ·菲荧光光谱及其测定第106-108页
     ·SPM上菲分配第108-111页
     ·离子强度影响第111页
     ·pH影响第111-112页
     ·温度影响第112-113页
     ·菲在SPM上的反分配第113-114页
   ·小结第114-115页
第9章 菲在降解菌ZP1及大肠杆菌细胞膜分配比较第115-122页
   ·材料与方法第115-117页
     ·材料第115页
     ·仪器第115页
     ·细菌的培养第115-116页
     ·细胞膜磷脂的测定第116页
     ·菲在大肠杆菌及降解菌中的分配实验第116-117页
   ·结果与讨论第117-121页
     ·菌体生长曲线第117-118页
     ·菲在细胞膜上的分配第118-121页
   ·小结第121-122页
第10章 结论与展望第122-125页
致谢第125-126页
参考文献第126-140页
个人简历 在读期间发表的学术论文与研究成果第140-141页

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