| 中文摘要 | 第1-15页 |
| ABSTRACT | 第15-18页 |
| 英文缩略词 | 第18-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-53页 |
| 第一节 Survivin研究进展 | 第19-36页 |
| 1.Survivin基因与蛋白结构及其表达调控 | 第19-22页 |
| ·基因结构 | 第19-20页 |
| ·蛋白结构 | 第20-22页 |
| ·表达调控 | 第22页 |
| 2.Survivin的生物学功能 | 第22-26页 |
| ·Survivin在细胞内的定位与磷酸化作用 | 第22-24页 |
| ·Survivin在正常组织中的表达及意义 | 第24页 |
| ·Survivin对肿瘤细胞的增殖和抗凋亡双重作用 | 第24-26页 |
| 3.Survivin与其他基因、蛋白的关系 | 第26-27页 |
| ·Survivin与P53及Bcl-2的关系 | 第26-27页 |
| ·Survivin与Caspase的关系 | 第27页 |
| ·Survivin与cdk4的关系 | 第27页 |
| ·Survivin与p34~(cdc2)的关系 | 第27页 |
| 4.Survivin与血管生成 | 第27-28页 |
| 5.Survivin 的表达与肿瘤 | 第28-29页 |
| ·Survivin在不同肿瘤组织中的表达 | 第28-29页 |
| ·Survivin在肿瘤组织中表达的临床意义 | 第29页 |
| 6.Survivin与细胞凋亡 | 第29-32页 |
| ·细胞凋亡及其意义 | 第29-30页 |
| ·细胞凋亡途径与凋亡抑制家族 | 第30-32页 |
| ·Survivin对肿瘤细胞凋亡的抑制作用 | 第32页 |
| 7.Survivin对肿瘤细胞周期的作用与机制 | 第32-33页 |
| ·Survivin对肿瘤细胞周期的调控 | 第32-33页 |
| ·Survivin对肿瘤细生长周期的调节机制 | 第33页 |
| 8.Survivin表达与肿瘤预后 | 第33页 |
| 9.Survivin表达与肿瘤治疗耐受性 | 第33-34页 |
| 10.Survivin在肿瘤的诊断和治疗中的前景 | 第34-36页 |
| 第二节 以Survivin为靶标的抗癌策略与TAT转导肽的意义 | 第36-53页 |
| 1.Survivin作为抗癌靶的确认 | 第36-37页 |
| 2.Survivin作为肿瘤靶标分子的优点 | 第37页 |
| 3.靶向Survivin治疗肿瘤的前景 | 第37-38页 |
| 4.靶向Survivin的药物设计策略 | 第38-43页 |
| ·反义寡核苷酸技术 | 第38-39页 |
| ·核酶靶Survivin治疗技术 | 第39页 |
| ·RNA干扰技术 | 第39-40页 |
| ·负显性突变体基因治疗 | 第40-41页 |
| ·细胞周期依赖性激酶抑制剂 | 第41-43页 |
| 5.肿瘤基因治疗的现状与前景 | 第43-44页 |
| 6.以Survivin为靶标的蛋白药物及其所面临的问题 | 第44-45页 |
| 7.蛋白质转导域及其主要类型与特点 | 第45-47页 |
| ·蛋白质转导域及其主要类型 | 第45-46页 |
| ·蛋白质转导域的特点 | 第46-47页 |
| 8.HIV-TAT及其PTD区段的结构与功能 | 第47-49页 |
| ·HIV-TAT转导域的发现 | 第47页 |
| ·TAT的基本结构 | 第47页 |
| ·TAT蛋白PTD的功能研究 | 第47-49页 |
| 9.TAT蛋白PTD的作用机制研究 | 第49-51页 |
| 10.TAT及其人工突变体在大分子药物转导中的应用前景 | 第51页 |
| 11.本课题的研究目的及意义 | 第51-53页 |
| 第二章 人源Survivin基因及其可变剪接体的克隆与生物信息学分析 | 第53-71页 |
| ·实验材料 | 第54-56页 |
| ·细胞与载体 | 第54页 |
| ·主要仪器设备 | 第54-55页 |
| ·主要试剂(盒)及培养基 | 第55-56页 |
| ·实验方法 | 第56-60页 |
| ·细胞培养 | 第56-57页 |
| ·感受态细胞的制备、质粒的转化和提取 | 第57-58页 |
| ·引物设计 | 第58页 |
| ·Survivin总RNA提取 | 第58-59页 |
| ·Survivin基因的RT-PCR扩增 | 第59页 |
| ·PCR产物在pGEM-T vector上的克隆与鉴定 | 第59页 |
| ·Survivin及其剪接体的核酸序列测定 | 第59-60页 |
| ·Survivin及其剪接体的核酸与蛋白序列的生物信息学分析 | 第60页 |
| ·实验结果 | 第60-68页 |
| ·总RNA的提取与Survivin基因的扩增结果 | 第60-61页 |
| ·Survivin及其剪接体基因的T载体克隆与鉴定结果 | 第61-62页 |
| ·Survivin及其剪接体的测序结果分析 | 第62-65页 |
| ·Survivin及其剪接体基因结构组成分析结果 | 第65页 |
| ·Survivin及其剪接体编码的氨基酸的比对分析结果 | 第65-66页 |
| ·Survivin及其剪接体蛋白的3D结构模拟与分析结果 | 第66-68页 |
| ·讨论 | 第68-70页 |
| ·人乳腺癌细胞系中Survivin及其剪接体的克隆与用途 | 第68页 |
| ·Survivin新剪接体的克隆与意义 | 第68-69页 |
| ·Survivin及其剪接体的生物信息学分析意义 | 第69-70页 |
| ·小结 | 第70-71页 |
| 第三章 基于Survivin的基因药物设计、制备与促癌细胞凋亡研究 | 第71-87页 |
| ·实验材料 | 第73-75页 |
| ·细胞与载体 | 第73-74页 |
| ·主要试剂与培养基 | 第74页 |
| ·主要仪器设备 | 第74页 |
| ·引物的设计与合成 | 第74-75页 |
| ·实验方法 | 第75-79页 |
| ·感受态细胞的制备、质粒的转化和提取 | 第75页 |
| ·survivin基因的PCR定点突变与序列测定 | 第75-77页 |
| ·EGFP基因的PCR扩增与序列测定 | 第77页 |
| ·Survivin及其剪接体不同真核表达载体的构建与鉴定 | 第77-78页 |
| ·基因治疗载体对人乳腺癌细胞B-Cap-37的转染及转染效果分析 | 第78页 |
| ·不同基因药物对癌细胞的促凋亡效果检测 | 第78-79页 |
| ·实验结果 | 第79-84页 |
| ·Survivin基因的PCR定点突变结果 | 第79页 |
| ·EGFP基因扩增与测序结果 | 第79-80页 |
| ·Survivin及其剪接体不同真核表达载体的构建结果 | 第80-81页 |
| ·基因治疗载体转染人乳腺癌细胞后的荧光检测结果 | 第81-82页 |
| ·基因治疗载体转染人乳腺癌细胞后的MTT检测结果及凋亡效果评价 | 第82-84页 |
| ·讨论 | 第84-86页 |
| ·Survivin负显性突变体与定点突变技术 | 第84页 |
| ·以survivin及其剪接体为基础构建促凋亡基因药物的策略与方法 | 第84-85页 |
| ·细胞转染技术及转染试剂的选择 | 第85-86页 |
| ·以survivin及其剪接体为基础的基因治疗的效果与意义 | 第86页 |
| ·小结 | 第86-87页 |
| 第四章 重组蛋白TATm-Survivin(T34A)的基因构建、高效表达与纯化鉴定 | 第87-105页 |
| ·实验材料 | 第88-90页 |
| ·菌株和质粒 | 第88页 |
| ·主要试剂及培养基 | 第88-89页 |
| ·主要仪器 | 第89-90页 |
| ·实验方法 | 第90-95页 |
| ·质粒提取与转化 | 第90页 |
| ·Survivin基因的定点突变 | 第90页 |
| ·TAT蛋白转导结构域的构建 | 第90-91页 |
| ·重组表达质粒的构建与鉴定 | 第91-92页 |
| ·重组蛋白的核苷酸序列分析 | 第92-93页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第93页 |
| ·表达蛋白含量的测定 | 第93页 |
| ·不同诱导条件对TATm-Survivin(T34A)基因表达的影响 | 第93-94页 |
| ·目的蛋白的免疫印迹鉴定 | 第94页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第94-95页 |
| ·实验结果 | 第95-102页 |
| ·重组表达质粒pRSET-B-TATm-Survivin(T34A)的构建与鉴定结果 | 第95-96页 |
| ·重组表达载体的核苷酸测序结果分析 | 第96页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第96-97页 |
| ·目的蛋白的表达方式鉴定 | 第97-98页 |
| ·不同诱导条件对TATm-Survivin(T34A)基因表达的影响 | 第98-99页 |
| ·重组蛋白的免疫印记实验结果 | 第99页 |
| ·目的蛋白的分批发酵培养表达结果 | 第99-100页 |
| ·表达产物TATm-Survivin(T34A)纯化和复性结果 | 第100-102页 |
| ·讨论 | 第102-104页 |
| ·以Survivin为肿瘤治疗靶点药物的设计与重组蛋白药物设计的意义 | 第102-103页 |
| ·基因工程大肠杆菌高效发酵生产TATm-Survivin的影响因素 | 第103页 |
| ·以包涵体形式表达TATm-Survivin的分离纯化与优缺点 | 第103-104页 |
| ·小结 | 第104-105页 |
| 第五章 重组蛋白TATm-Survivin(T34A)在体内外促癌细胞凋亡研究 | 第105-125页 |
| ·实验材料 | 第106-107页 |
| ·细胞株和实验动物 | 第106页 |
| ·主要试剂及其配置 | 第106-107页 |
| ·主要仪器设备 | 第107页 |
| ·实验方法 | 第107-111页 |
| ·细胞培养方法 | 第107页 |
| ·药物的配制与贮存 | 第107页 |
| ·TATm-Survivin(T34A)体外促细胞凋亡作用 | 第107-109页 |
| ·人乳腺癌B-Cap-37细胞裸小鼠移植瘤模型的建立 | 第109-110页 |
| ·体内试验药物的内毒素与溶血性检测 | 第110-111页 |
| ·TATm-Survivin(T34A)动物体内活性检测与评价 | 第111页 |
| ·实验结果 | 第111-120页 |
| ·光镜下观察药物蛋白对细胞的影响 | 第111-113页 |
| ·MTT法检测TATm-Survivin(T34A)对癌细胞生长的抑制作用 | 第113-114页 |
| ·流式细胞技术检测TATm-Survivin(T34A)处理后的细胞周期改变 | 第114-115页 |
| ·萤光染色法检测凋亡结果 | 第115-116页 |
| ·蛋白药物对癌细胞集落形成的影响 | 第116-117页 |
| ·药物的溶血性实验结果 | 第117-118页 |
| ·人乳腺癌细胞B-Cap-37细胞的BALB／cA-nu小鼠模型的建立 | 第118-119页 |
| ·药物处理对BALB／cA-nu裸鼠的体重及行为表现的影响 | 第119-120页 |
| ·在体内TATm-survivin(T34A)对BALB／cA-nu裸鼠肿瘤形成的影响 | 第120页 |
| ·讨论 | 第120-124页 |
| ·重组蛋白药物对离体癌细胞促凋亡活性检测方法分析 | 第120-122页 |
| ·实体瘤动物模型的建立及其作用 | 第122-123页 |
| ·重组蛋白TATm-Survivin(T34A)对动物的安全性与毒性 | 第123页 |
| ·重组蛋白TATm-survivin(T34A)对荷瘤小鼠的作用与意义 | 第123-124页 |
| ·小结 | 第124-125页 |
| 结论 | 第125-127页 |
| 参考文献 | 第127-142页 |
| 致谢 | 第142-143页 |
| 发表文章 | 第143页 |
