| 第一章 环酰胺水解酶(综述) | 第1-39页 |
| 1 环酰胺水解酶的类型 | 第16-23页 |
| ·环酰脲水解酶类 | 第16-21页 |
| ·环酰亚胺水解酶类 | 第21-23页 |
| 2 环酰胺水解酶的结构特征 | 第23-26页 |
| 3 环酰胺水解酶的反应机理 | 第26-29页 |
| ·环酰胺水解酶的反应机理 | 第26-28页 |
| ·海因酶对底物手性选择的依赖性 | 第28-29页 |
| 4 环酰胺水解酶的系统发育和分子进化 | 第29页 |
| 5 环酰胺水解酶的应用 | 第29-30页 |
| 6 海因酶和环酰亚胺酶的研究展望 | 第30-34页 |
| ·海因酶 | 第30-32页 |
| ·环酰亚胺酶 | 第32-34页 |
| 7 参考文献 | 第34-39页 |
| 第二章 假单胞杆菌YZ26的菌种鉴定及产海因酶活性 | 第39-47页 |
| 1 前言 | 第39页 |
| 2 材料与方法 | 第39-41页 |
| ·菌株，培养基以及染液 | 第39-40页 |
| ·形态观察及生理生化特征 | 第40页 |
| ·16S rDNA序列扩增和分析 | 第40页 |
| ·水解海因及其衍生物的活性测定 | 第40-41页 |
| 3 结果 | 第41-45页 |
| ·形态特征 | 第41页 |
| ·生理生化性质 | 第41-42页 |
| ·16S rDNA扩增序列 | 第42页 |
| ·16S rDNA基因序列分析 | 第42-45页 |
| ·对不同底物水解能力的比较 | 第45页 |
| 4 讨论 | 第45-46页 |
| 5 参考文献 | 第46-47页 |
| 第三章 D—海因酶基因的克隆及序列分析 | 第47-56页 |
| 1 前言 | 第47页 |
| 2 材料与方法 | 第47-49页 |
| ·主要仪器设备 | 第47-48页 |
| ·主要试剂与菌株 | 第48页 |
| ·方法 | 第48-49页 |
| 3 结果 | 第49-53页 |
| ·D-海因酶基因的扩增与克隆 | 第49-50页 |
| ·D-海因酶基因序列分析 | 第50-51页 |
| ·D-海因酶氨基酸序列的同源性分析 | 第51-52页 |
| ·不同D-海因酶氨基酸残基的疏水性分析 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-54页 |
| 5 参考文献 | 第54-56页 |
| 第四章 D-海因酶在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第56-66页 |
| 1 前言 | 第56页 |
| 2 材料与方法 | 第56-58页 |
| ·质粒和菌株 | 第56页 |
| ·生化试剂 | 第56页 |
| ·寡核苷酸片段合成 | 第56-57页 |
| ·方法 | 第57-58页 |
| 3 结果 | 第58-63页 |
| ·重组D-海因酶的生物转化 | 第58-60页 |
| ·不同形式重组D-海因酶的表达及活性比较 | 第60页 |
| ·非融合D-海因酶的纯化 | 第60-62页 |
| ·融合D-海因酶的纯化 | 第62-63页 |
| 4 讨论 | 第63-64页 |
| 5 参考文献 | 第64-66页 |
| 第五章 重组D-海因酶的酶学性质 | 第66-75页 |
| 1 前言 | 第66页 |
| 2.材料与方法 | 第66-67页 |
| ·材料 | 第66页 |
| ·方法 | 第66-67页 |
| 3.结果与讨论 | 第67-72页 |
| ·酶分子量的测定及亚基组成 | 第67页 |
| ·pH及温度对D-海因酶活性的影响 | 第67-70页 |
| ·D-海因酶的底物专一性 | 第70页 |
| ·D-海因酶的动力学参数 | 第70页 |
| ·不同金属离子对D-海因酶活性的影响 | 第70-71页 |
| ·锌离子对D-海因酶寡聚体的影响 | 第71-72页 |
| 4 小结 | 第72-73页 |
| 5 参考文献 | 第73-75页 |
| 第六章 D-海因酶和N氨甲酰氨基酸水解酶的串联表达和活性分析 | 第75-81页 |
| 1 前言 | 第75页 |
| 2 材料与方法 | 第75-77页 |
| ·材料 | 第75-76页 |
| ·D-海因酶和水解酶的分别表达及串联表达载体的构建 | 第76页 |
| ·D-海因酶和N氨甲酰氨基酸水解酶的分别表达及串联表达 | 第76页 |
| ·酶活性测定 | 第76-77页 |
| 3 结果与讨论 | 第77-79页 |
| ·分别表达、共表达以及串联表达的D-海因酶和水解酶活性 | 第77-78页 |
| ·串联表达蛋白的电泳分析 | 第78-79页 |
| 4 参考文献 | 第79-81页 |
| 第七章 环酰亚胺酶基因的克隆和序列分析 | 第81-90页 |
| 1 前言 | 第81页 |
| 2 材料与方法 | 第81-83页 |
| ·材料 | 第81-82页 |
| ·方法 | 第82-83页 |
| 3 结果与讨论 | 第83-88页 |
| ·环酰亚胺酶基因文库的构建 | 第83-84页 |
| ·阳性重组子的酶切分析 | 第84页 |
| ·插入片段的DNA序列 | 第84-86页 |
| ·环酰亚胺酶基因的亚克隆 | 第86页 |
| ·环酰亚胺酶的基因序列的分析 | 第86-88页 |
| 4 小结 | 第88页 |
| 5 参考文献 | 第88-90页 |
| 第八章 环酰亚胺酶在大肠杆菌中表达、纯化与生化性质 | 第90-101页 |
| 1 前言 | 第90页 |
| 2 材料与方法 | 第90-92页 |
| ·菌株与培养基 | 第90页 |
| ·试剂与仪器 | 第90页 |
| ·环酰亚胺酶的表达与纯化 | 第90-91页 |
| ·环酰亚胺酶的活性测定 | 第91-92页 |
| ·环酰亚胺酶的天然分子量测定 | 第92页 |
| 3 结果与讨论 | 第92-99页 |
| ·重组环酰亚胺酶在大肠杆菌中的表达 | 第92页 |
| ·环酰亚胺酶的纯化 | 第92-93页 |
| ·酶分子量的测定及亚基组成 | 第93页 |
| ·环酰亚胺酶的底物专一性 | 第93-95页 |
| ·环酰亚胺酶的活性及转化率分析 | 第95-96页 |
| ·pH及温度对环酰亚胺酶活性的影响 | 第96-98页 |
| ·不同二价金属离子对环酰亚胺酶活性的影响 | 第98页 |
| ·锌离子对环酰亚胺酶活性的影响 | 第98-99页 |
| ·EDTA对环酰亚胺酶活性的影响 | 第99页 |
| ·不同化合物对环酰亚胺酶活性的影响 | 第99页 |
| 4 小结 | 第99-100页 |
| 5 参考文献 | 第100-101页 |
| 第九章 环酰亚胺酶的突变 | 第101-111页 |
| 1 前言 | 第101页 |
| 2 材料与方法 | 第101-104页 |
| ·材料 | 第101页 |
| ·方法 | 第101-104页 |
| 3 结果与讨论 | 第104-109页 |
| ·组氨酸突变引起CIH活性力变化 | 第104-105页 |
| ·C-端区氨基酸残基缺失与替代酶的表达和纯化 | 第105页 |
| ·C-端区氨基酸残基缺失与替代酶的活性 | 第105-107页 |
| ·C-端区氨基酸残基缺失与替代酶分子寡聚状态分析 | 第107页 |
| ·C-端区氨基酸残基缺失与替代酶分子荧光光谱 | 第107-109页 |
| ·C-端区氨基酸残基缺失与替代突变酶分子CD谱分析 | 第109页 |
| 4 讨论 | 第109-110页 |
| 5 参考文献 | 第110-111页 |
| 附录 攻读博士学位期间的研究工作 | 第111-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 承诺书 | 第115页 |
