| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-19页 |
| 1 低温诱导细胞凋亡及其调控机制的研究 | 第8-17页 |
| ·冷胁迫的主要特征 | 第8-10页 |
| ·冷引起的细胞损伤 | 第8-9页 |
| ·冷引起的细胞凋亡 | 第9-10页 |
| ·冷引起细胞凋亡的分子机制 | 第10-17页 |
| ·冷与 ROS | 第10-12页 |
| ·冷与 Fe~(2+)、丝氨酸蛋白酶 | 第12-13页 |
| ·冷与 Ca~(2+) | 第13-15页 |
| ·冷与钙调蛋白酶、蛋白激酶 C | 第15-16页 |
| ·冷与caspase家族 | 第16页 |
| ·冷诱导基因表达的变化 | 第16-17页 |
| ·小结 | 第17页 |
| 2 研究的提出 | 第17-19页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第19-37页 |
| 1 实验材料 | 第19-21页 |
| ·质粒 | 第19-20页 |
| ·菌株 | 第20-21页 |
| 2 实验方法 | 第21-32页 |
| ·分子克隆方法 | 第21-27页 |
| ·质粒小提 | 第21页 |
| ·DNA电泳 | 第21-22页 |
| ·质粒 DNA纯化 | 第22页 |
| ·DNA酶切 | 第22-23页 |
| ·载体脱磷 | 第23页 |
| ·DNA片段回收 | 第23-24页 |
| ·DNA连接 | 第24页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第24-26页 |
| ·感受态细胞制备 | 第26页 |
| ·大肠杆菌转化 | 第26-27页 |
| ·菌种保存 | 第27页 |
| ·酵母实验方法 | 第27-32页 |
| ·酵母转化 | 第27-28页 |
| ·酵母细胞总 DNA提取 | 第28-29页 |
| ·酵母蛋白抽提 | 第29页 |
| ·蛋白质电泳(SDS-PAGE) | 第29-30页 |
| ·酵母点样 | 第30页 |
| ·细胞存活率测定 | 第30-31页 |
| ·生长曲线测定 | 第31页 |
| ·FDA-PI双染 | 第31页 |
| ·DAPI染色 | 第31页 |
| ·透射电镜样本制备 | 第31-32页 |
| 3 培养基和实验试剂 | 第32-37页 |
| ·YPD(Yeast eXtract Peptone and Dextrose) | 第32页 |
| ·SD/gal/raf/-his(-ura) | 第32页 |
| ·SD/glu/-his(-ura) | 第32-33页 |
| ·质粒小提试剂 | 第33页 |
| ·DCFH-DA母液的配制 | 第33页 |
| ·FDA | 第33页 |
| ·PI | 第33-34页 |
| ·DAPI | 第34页 |
| ·PBS缓冲液 | 第34页 |
| ·蜗牛酶 | 第34页 |
| ·蛋白质提取试剂 | 第34-35页 |
| ·SDS-PAGE有关溶液 | 第35-36页 |
| ·GSH母液 | 第36-37页 |
| 第三章 实验结果和分析 | 第37-59页 |
| 1 PPBI-1基因表达载体的构建 | 第37-46页 |
| ·PYX112-PPBI-1的构建 | 第37-41页 |
| ·构建流程 | 第37-38页 |
| ·载体脱磷后回收 | 第38-39页 |
| ·PCR产物酶切回收 | 第39页 |
| ·菌落PCR验证 | 第39-40页 |
| ·酶切验证 | 第40-41页 |
| ·PpBI-1-GFP融合表达载体的构建 | 第41-46页 |
| ·pGilda-PpBI-1-GFP构建流程 | 第41-42页 |
| ·PCR产物电泳 | 第42页 |
| ·PCR产物酶切回收 | 第42-43页 |
| ·转化菌落的 PCR鉴定 | 第43页 |
| ·PpBI-GFP融合片段的酶切验证 | 第43-44页 |
| ·载体酶切 | 第44-45页 |
| ·回收产物检测 | 第45页 |
| ·重组子酶切验证 | 第45-46页 |
| 2 酵母转化及基因定位 | 第46-49页 |
| ·转 PYX112-X酵母的 PCR验证 | 第46页 |
| ·转pGilda-X酵母的 PCR验证 | 第46-47页 |
| ·SDS-PAGE | 第47-48页 |
| ·PpBI-1在酵母中的表达定位 | 第48-49页 |
| 3 冷诱导酵母细胞发生凋亡 | 第49-51页 |
| ·酵母冷处理后细胞学观察 | 第49-50页 |
| ·酵母冷处理后细胞核电镜观察 | 第50-51页 |
| 4 抗凋亡基因在酵母耐冷中的作用 | 第51-59页 |
| ·冷处理前后生长曲线 | 第51-52页 |
| ·温度敏感性 | 第52页 |
| ·FDA/PI双染 | 第52-53页 |
| ·冷处理后的细胞存活率 | 第53-54页 |
| ·冷诱导细胞内Ros上升 | 第54-55页 |
| ·PpBI-1调控冷诱导细胞内 Ca~(2+) | 第55-56页 |
| ·GSH减缓冷引起细胞损伤 | 第56-59页 |
| ·CY4和 CY8冷处理前后的生长曲线 | 第56-57页 |
| ·温度敏感性 | 第57-59页 |
| 第四章 讨论 | 第59-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 致谢 | 第68页 |