中文摘要 | 第1-4页 |
ABSTRACT | 第4-7页 |
前 言 | 第7-8页 |
第一章 文献综述 | 第8-20页 |
·B. subtilis 中葡萄糖的分解代谢 | 第8-9页 |
·B. subtilis 碳分解代谢物阻遏作用(CCR) | 第9-13页 |
·分解代谢物控制蛋白A(CcpA) | 第9-10页 |
·葡萄糖对EMP 途径的影响 | 第10-11页 |
·葡萄糖对TCA 循环的影响 | 第11-12页 |
·葡萄糖对溢流代谢的影响 | 第12页 |
·葡萄糖对PP 途径的影响 | 第12-13页 |
·B. subtilis 的PTS 系统 | 第13-16页 |
·B. subtilis PTS 系统的调控机制 | 第16-18页 |
·HPr-His15-P 于HPr-Se146-P | 第16页 |
·HprK/P | 第16-17页 |
·Crh | 第17-18页 |
·CcpA 缺陷对葡萄糖代谢和吸收的影响 | 第18页 |
·研究目的与实验策略 | 第18-20页 |
第二章 实验材料与方法 | 第20-34页 |
·实验材料 | 第20-24页 |
·菌种和质粒 | 第20页 |
·主要试剂 | 第20-21页 |
·培养基 | 第21-22页 |
·主要仪器 | 第22-23页 |
·主要药品 | 第23-24页 |
·实验方法 | 第24-34页 |
·琼脂糖凝胶电泳 | 第24页 |
·枯草芽孢杆菌染色体DNA 提取 | 第24-25页 |
·DNA 的纯化和浓缩 | 第25页 |
·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第25页 |
·质粒的小规模提取 | 第25-26页 |
·B.subtili524/pMX45 质粒的大规模提取 | 第26-27页 |
·PCR 扩增hprK 基因 | 第27页 |
·一次连接(构建重组质粒pHP13-hpr) | 第27-28页 |
·PCR 扩增氯霉素抗性基因(cat) | 第28-29页 |
·二次连接(构建重组质粒pHP13-hpr::Cm) | 第29-30页 |
·重组质粒pHP13-hpr::Cm 上PCR 扩增hpr::Cm 片段 | 第30页 |
·B.subtili524A1 原生质体的制备与转化 | 第30-31页 |
·转化子的验证 | 第31页 |
·B.subtilis 发酵产物的测定 | 第31-34页 |
·发酵液中核黄素的测定 | 第31-32页 |
·发酵液中残糖的定量测定 | 第32-34页 |
第三章 结果与讨论 | 第34-49页 |
·B.subtilis24A1 的hprK 基因敲除 | 第34-41页 |
·hprK 基因的敲除策略 | 第34-36页 |
·hprK 基因的PCR 扩增 | 第36-37页 |
·重组质粒pHP13-hpr 的构建 | 第37-38页 |
·氯霉素抗性基因(cat)的PCR 扩增 | 第38-39页 |
·重组质粒pHP13-hpr::Cm 的构建 | 第39-40页 |
·B.subtilis24A1 菌株hprK 基因敲除及转化子筛选 | 第40-41页 |
·质粒pMX45 的转化 | 第41-42页 |
·B. subtilisZHc/pMX45 的发酵特性 | 第42-49页 |
·B.subtilisZHc/pMX45 的蔗糖发酵 | 第43-45页 |
·HprK/P 缺陷对B.subtilis 蔗糖吸收的影响 | 第43-45页 |
·HprK/P 缺陷对B.subtilis 蔗糖发酵核黄素产量的影响 | 第45页 |
·B.subtilisZHc/pMX45 的葡萄糖发酵 | 第45-49页 |
·HprK/P 缺陷对B.subtilis 葡萄糖吸收的影响 | 第46-47页 |
·HprK/P 缺陷对B.subtilis 葡萄糖发酵和黄素产量的影响 | 第47-49页 |
第四章 结论与展望 | 第49-50页 |
·主要结论 | 第49页 |
·展望 | 第49-50页 |
参考文献 | 第50-53页 |
致谢 | 第53页 |