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产核黄素枯草芽孢杆菌hprK基因敲除及其发酵特性的研究

中文摘要第1-4页
ABSTRACT第4-7页
前 言第7-8页
第一章 文献综述第8-20页
   ·B. subtilis 中葡萄糖的分解代谢第8-9页
   ·B. subtilis 碳分解代谢物阻遏作用(CCR)第9-13页
     ·分解代谢物控制蛋白A(CcpA)第9-10页
     ·葡萄糖对EMP 途径的影响第10-11页
     ·葡萄糖对TCA 循环的影响第11-12页
     ·葡萄糖对溢流代谢的影响第12页
     ·葡萄糖对PP 途径的影响第12-13页
   ·B. subtilis 的PTS 系统第13-16页
   ·B. subtilis PTS 系统的调控机制第16-18页
     ·HPr-His15-P 于HPr-Se146-P第16页
     ·HprK/P第16-17页
     ·Crh第17-18页
   ·CcpA 缺陷对葡萄糖代谢和吸收的影响第18页
   ·研究目的与实验策略第18-20页
第二章 实验材料与方法第20-34页
   ·实验材料第20-24页
     ·菌种和质粒第20页
     ·主要试剂第20-21页
     ·培养基第21-22页
     ·主要仪器第22-23页
     ·主要药品第23-24页
   ·实验方法第24-34页
     ·琼脂糖凝胶电泳第24页
     ·枯草芽孢杆菌染色体DNA 提取第24-25页
     ·DNA 的纯化和浓缩第25页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化第25页
     ·质粒的小规模提取第25-26页
     ·B.subtili524/pMX45 质粒的大规模提取第26-27页
     ·PCR 扩增hprK 基因第27页
     ·一次连接(构建重组质粒pHP13-hpr)第27-28页
     ·PCR 扩增氯霉素抗性基因(cat)第28-29页
     ·二次连接(构建重组质粒pHP13-hpr::Cm)第29-30页
     ·重组质粒pHP13-hpr::Cm 上PCR 扩增hpr::Cm 片段第30页
     ·B.subtili524A1 原生质体的制备与转化第30-31页
     ·转化子的验证第31页
     ·B.subtilis 发酵产物的测定第31-34页
       ·发酵液中核黄素的测定第31-32页
       ·发酵液中残糖的定量测定第32-34页
第三章 结果与讨论第34-49页
   ·B.subtilis24A1 的hprK 基因敲除第34-41页
     ·hprK 基因的敲除策略第34-36页
     ·hprK 基因的PCR 扩增第36-37页
     ·重组质粒pHP13-hpr 的构建第37-38页
     ·氯霉素抗性基因(cat)的PCR 扩增第38-39页
     ·重组质粒pHP13-hpr::Cm 的构建第39-40页
     ·B.subtilis24A1 菌株hprK 基因敲除及转化子筛选第40-41页
   ·质粒pMX45 的转化第41-42页
   ·B. subtilisZHc/pMX45 的发酵特性第42-49页
     ·B.subtilisZHc/pMX45 的蔗糖发酵第43-45页
       ·HprK/P 缺陷对B.subtilis 蔗糖吸收的影响第43-45页
       ·HprK/P 缺陷对B.subtilis 蔗糖发酵核黄素产量的影响第45页
     ·B.subtilisZHc/pMX45 的葡萄糖发酵第45-49页
       ·HprK/P 缺陷对B.subtilis 葡萄糖吸收的影响第46-47页
       ·HprK/P 缺陷对B.subtilis 葡萄糖发酵和黄素产量的影响第47-49页
第四章 结论与展望第49-50页
   ·主要结论第49页
   ·展望第49-50页
参考文献第50-53页
致谢第53页

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