| 独创性声明 | 第1页 |
| 论文使用授权的说明 | 第3-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| 英文摘要 | 第11-14页 |
| 前言 | 第14-39页 |
| 1 标记基因及其在微生物分子生态学研究中的应用 | 第14-27页 |
| ·标记基因概念 | 第14-15页 |
| ·在微生物分子生态学研究中应用的标记基因种类 | 第15-18页 |
| ·抗生素抗性基因 | 第15页 |
| ·重金属抗性基因 | 第15页 |
| ·冰核形成基因 | 第15-16页 |
| ·生色基因 | 第16页 |
| ·生物发光基因 | 第16-17页 |
| ·绿色荧光蛋白基因 | 第17-18页 |
| ·绿色荧光蛋白(GFP)及其在微生物分子生态学中的应用 | 第18-27页 |
| ·GFP的结构及发光特性 | 第18-19页 |
| ·GFP的突变体 | 第19-22页 |
| ·GFP的特点 | 第22页 |
| ·GFP在微生物中的转化及检测方法 | 第22-23页 |
| ·GFP在微生物分子生态学中的应用 | 第23-26页 |
| ·展望 | 第26-27页 |
| 2 根际细菌防治植物线虫研究进展 | 第27-37页 |
| ·植物线虫发生与危害 | 第27-28页 |
| ·植物线虫的生物防治 | 第28-30页 |
| ·植物线虫的防治策略 | 第28-29页 |
| ·植物线虫的生防研究概况 | 第29-30页 |
| ·植物根际细菌对线虫的生物防治 | 第30-37页 |
| ·植物根际及根际细菌 | 第30-31页 |
| ·抗线虫根际细菌种类 | 第31-34页 |
| ·影响根际细菌抗线虫功能的因素 | 第34-36页 |
| ·对根际细菌抗线虫机理的推测 | 第36-37页 |
| 3 本项目的研究背景及研究内容 | 第37-39页 |
| ·研究背景 | 第37-38页 |
| ·本项目的研究内容 | 第38-39页 |
| 第一章 线虫拮抗菌BC2000的分子鉴定及gfp/luxAB双基因标记 | 第39-54页 |
| 1 材料和方法 | 第39-46页 |
| ·菌株、质粒及培养基 | 第39-40页 |
| ·试剂及仪器 | 第40页 |
| ·BC2000 16S rRNA基因克隆及测序 | 第40-42页 |
| ·细菌基因组DNA提取 | 第40-41页 |
| ·PCR扩增及产物纯化 | 第41页 |
| ·连接反应 | 第41-42页 |
| ·序列分析及GenBank中的注册号 | 第42页 |
| ·抗生素抗性分析 | 第42页 |
| ·BC2000电转化试验 | 第42-44页 |
| ·质粒提取 | 第42页 |
| ·质粒DNA的定量分析 | 第42页 |
| ·NotI酶切鉴定 | 第42-43页 |
| ·BC2000感受态细胞的制备 | 第43页 |
| ·电转化 | 第43页 |
| ·阳性转化子的荧光检测 | 第43-44页 |
| ·标记菌的PCR鉴定 | 第44页 |
| ·细菌基因组DNA提取 | 第44页 |
| ·PCR扩增 | 第44页 |
| ·Southern杂交检测 | 第44-45页 |
| ·DNA提取、酶切及电泳 | 第44-45页 |
| ·转膜及固定 | 第45页 |
| ·探针制备及杂交检测 | 第45页 |
| ·荧光素酶活性测定 | 第45-46页 |
| ·标记菌BC2001的分子鉴定 | 第46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-51页 |
| ·BC200016S rRNA基因克隆及测序 | 第46-47页 |
| ·抗生素抗性分析 | 第47页 |
| ·gfp／luxAB基因转化粪产碱菌BC2000 | 第47-48页 |
| ·标记菌BC2001的PCR鉴定 | 第48-49页 |
| ·Southern杂交检测 | 第49-50页 |
| ·荧光素酶活性检测 | 第50页 |
| ·标记菌BC2001的分子鉴定 | 第50-51页 |
| 3 讨论 | 第51-54页 |
| 第二章 GFP标记菌BC2001的生物学特性研究 | 第54-69页 |
| 1 材料和方法 | 第54-58页 |
| ·供试菌株、培养方法及主要仪器 | 第54页 |
| ·菌落形态及菌体形态观察 | 第54-56页 |
| ·菌落形态观察 | 第54-55页 |
| ·激光共聚焦显微镜观察细胞形态 | 第55页 |
| ·电镜观察 | 第55页 |
| ·流式细胞仪分析法 | 第55-56页 |
| ·GFP标记对菌株生长的影响 | 第56页 |
| ·不同温度对菌株生长及GFP表达的影响 | 第56页 |
| ·不同pH值对菌株生长及GFP表达的影响 | 第56-57页 |
| ·标记菌株BC2001中GFP表达稳定性 | 第57页 |
| ·标记菌在不同温度土壤中的存活能力 | 第57-58页 |
| ·土壤接种方法取样 | 第57页 |
| ·从土壤中收集细菌的方法 | 第57页 |
| ·平板计数 | 第57-58页 |
| ·流式细胞仪检测土壤分离细菌的荧光强度 | 第58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-65页 |
| ·菌落形态和菌体形态观察 | 第58-60页 |
| ·外源基因标记对菌株生长的影响 | 第60页 |
| ·酸碱度对菌株生长及GFP表达的影响 | 第60-61页 |
| ·不同温度对菌株生长及GFP表达的影响 | 第61-63页 |
| ·标记菌株BC2001中GFP表达稳定性 | 第63-64页 |
| ·标记菌株BC2001在不同温度土壤中的存活能力 | 第64-65页 |
| 3 讨论 | 第65-69页 |
| 第三章 GFP标记菌BC2001的防病促生功能及其在根际的定殖研究 | 第69-92页 |
| 1 材料与方法 | 第69-75页 |
| ·材料 | 第69页 |
| ·主要仪器 | 第69-70页 |
| ·GFP标记菌BC2001的生防及促生功能研究 | 第70-72页 |
| ·BC2001拮抗线虫的室内毒力实验 | 第70-71页 |
| ·盆栽试验 | 第71-72页 |
| ·GFP标记菌BC2001在土壤及根际的定殖研究 | 第72-75页 |
| ·荧光显微镜观察GFP标记菌BC2001在土壤中的定殖 | 第72页 |
| ·立体荧光显微镜观察GFP标记菌BC2001在番茄根部的定殖 | 第72-73页 |
| ·激光共聚焦显微镜观察 | 第73页 |
| ·GFP标记菌在盆栽番茄根际及植物组织内的定殖监测 | 第73-75页 |
| 2 结果与分析 | 第75-87页 |
| ·BC2001防病促生功能研究 | 第75-80页 |
| ·BC2001对M.incotiga卵的抑制作用及形态学观察 | 第75-77页 |
| ·BC2001对M.incotiga二龄幼虫的抑制作用及形态学观 | 第77-78页 |
| ·BC2001促生功能研究 | 第78-79页 |
| ·标记菌BC2001对番茄根结线虫侵染的影响 | 第79-80页 |
| ·GFP标记菌在土壤及植物组织内的显微观察 | 第80-81页 |
| ·荧光显微镜及立体荧光显微观察土壤及番茄根表的GFP标记菌BC2001 | 第80页 |
| ·激光共聚焦显微镜观察GFP标记菌BC2001在番茄种子及根、茎部的定殖 | 第80-81页 |
| ·平板计数法对GFP标记菌在番茄根际及组织内的定殖监测 | 第81-85页 |
| ·种子接种对GFP标记菌BC2001在番茄根际及植物组织内定殖的影响 | 第81-83页 |
| ·苗期浇菌对GFP标记菌BC2001在番茄根际及植物组织内定殖的影响 | 第83-85页 |
| ·PCR方法检测BC2001在番茄中的定殖情况 | 第85-87页 |
| 3 讨论 | 第87-92页 |
| ·GFP标记菌BC2001的防病促生功能研究 | 第87-89页 |
| ·GFP标记菌株的定殖研究 | 第89-92页 |
| 小结 | 第92-93页 |
| 有待进一步研究的内容 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-110页 |
| 附录一：彩图 | 第110-115页 |
| 附录二：缩写词和英汉对照 | 第115-117页 |
| 附录三：本研究使用的试剂与溶液的配制 | 第117-121页 |
| 致谢 | 第121页 |
