| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-8页 |
| 引言 | 第8-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-22页 |
| 1．1 蝎毒 | 第10-16页 |
| 1．1．1 蝎长链神经毒素的蛋白质序列、分类与生物功能 | 第10-11页 |
| 1．1．2 蝎长链神经毒素的高级结构 | 第11-12页 |
| 1．1．3 蝎神经毒素AaIT | 第12-16页 |
| 1．2 大肠杆菌表达系统的改良 | 第16-17页 |
| 1．3 醉母菌的表达系统 | 第17-22页 |
| 1．3．1 酵母菌的载体 | 第17-18页 |
| 1．3．2 巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第18-22页 |
| 2 材料和方法 | 第22-35页 |
| 2．1 材料 | 第22-27页 |
| 2．1．1 菌株、质粒以及目的基因 | 第22页 |
| 2．1．2 供试虫 | 第22页 |
| 2．1．3 主要工具酶与试剂 | 第22页 |
| 2．1．4 药品及培养基 | 第22-23页 |
| 2．1．5 寡核苷酸引物的合成 | 第23页 |
| 2．1．6 培养基及溶液的配制 | 第23-27页 |
| 2．2 试验方法 | 第27-35页 |
| 2．2．1 PCR产物的回收与纯化 | 第27-28页 |
| 2．2．2 大肠杆菌的转化 | 第28-29页 |
| 2．2．3 碱裂解法提取质粒DNA | 第29页 |
| 2．2．4 含重组质粒的大肠杆菌的诱导表达 | 第29页 |
| 2．2．5 大肠杆菌基因工程蛋白的粗提取 | 第29-30页 |
| 2．2．6 Ni2+柱亲和层析法纯化带His6标记的蛋白 | 第30-31页 |
| 2．2．7 蛋白质浓度以及目的蛋白占总蛋白的含量的测定 | 第31-32页 |
| 2．2．8 重组表达质粒转化Pichia pastoris X-33 | 第32-33页 |
| 2．2．9 重组酵母菌X-33的筛选与鉴定 | 第33页 |
| 2．2．10 AaIT在酵母中的诱导表达 | 第33-34页 |
| 2．2．11 酵母诱导条件的摸索 | 第34页 |
| 2．2．12 酵母发酵上清的浓缩处理 | 第34页 |
| 2．2．13 生物测定 | 第34-35页 |
| 3 实验结果 | 第35-41页 |
| 3．1 AaIT序列的优化 | 第35页 |
| 3．2 AaIT原核非融合表达 | 第35-36页 |
| 3．3 AaIT原核融合表达 | 第36-38页 |
| 3．4 重组穿梭质粒pPIC6α-AaIT的构建 | 第38-39页 |
| 3．5 AaIT在毕赤酵母中的诱导表达 | 第39页 |
| 3．6 生物活性测定 | 第39-41页 |
| 4 分析与讨论 | 第41-47页 |
| 4．1 大肠杆菌表达AaIT可行性研究 | 第41-42页 |
| 4．1．1 大肠杆菌菌株的选择 | 第41页 |
| 4．1．2 大肠杆菌Origami(DE3)表达AaIT的诱导条件 | 第41-42页 |
| 4．1．3 大肠杆菌系统的局限性 | 第42页 |
| 4．2 用酵母表达蝎毒素AaIT | 第42-46页 |
| 4．2．1 引物的设计 | 第42页 |
| 4．2．2 分泌信号肽的应用 | 第42-43页 |
| 4．2．3 酵母工程菌的筛选 | 第43页 |
| 4．2．4 AaIT在毕赤酵母中的诱导表达 | 第43-44页 |
| 4．2．5 AaIT在酵母中表达的影响因素 | 第44-46页 |
| 4．3 密码子优化对AaIT表达的影响 | 第46页 |
| 4．4 重组AaIT的生物活性 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 硕士研究生期间发表论文 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52页 |
