| 摘 要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-50页 |
| ·组织激肽释放酶 | 第13页 |
| ·组织激肽释放酶家族及其基因位点和结构特点 | 第13-14页 |
| ·组织激肽释放酶的表达及调控 | 第14-15页 |
| ·组织激肽释放酶的生物化学及物理化学特点 | 第15-16页 |
| ·组织激肽释放酶-激肽系统（KKS） | 第16-18页 |
| ·组织激肽释放酶与疾病的关系 | 第18-21页 |
| ·组织激肽释放酶对血压和心率的影响 | 第18-19页 |
| ·组织激肽释放酶对心脏和血管形态功能的影响 | 第19页 |
| ·组织激肽释放酶与肾脏功能衰竭 | 第19-20页 |
| ·组织激肽释放酶与缺血性脑中风 | 第20-21页 |
| ·组织激肽释放酶的基因克隆与表达 | 第21-23页 |
| ·组织激肽释放酶的分离纯化 | 第23-31页 |
| ·蛋白质规模化分离、小分子分离和蛋白质分析的区别 | 第23-25页 |
| ·径向色谱技术 | 第25-26页 |
| ·基因工程人组织激肽释放酶的分离纯化 | 第26-30页 |
| ·组织激肽释放酶的鉴定 | 第30-31页 |
| ·人组织激肽释放酶的研究现状 | 第31-32页 |
| 本论文主要工作 | 第32-34页 |
| 参考文献 | 第34-50页 |
| 第二章 用于病毒扩增和蛋白表达的昆虫细胞培养 | 第50-70页 |
| ·引言 | 第50-51页 |
| ·Sf-9 细胞的培养 | 第51-58页 |
| ·仪器与材料 | 第51-52页 |
| ·实验方法 | 第52-54页 |
| ·玻璃器皿的无菌处理 | 第52页 |
| ·HyQ CCM_3 培养基的配制 | 第52-53页 |
| ·培养基的除菌 | 第53页 |
| ·细胞计数方法 | 第53-54页 |
| ·实验方法及结果 | 第54-58页 |
| ·Sf-9 细胞的复苏 | 第54页 |
| ·Sf-9 细胞的冻存 | 第54-55页 |
| ·Sf-9 细胞的贴壁培养 | 第55-56页 |
| ·Sf-9 细胞的无血清适应 | 第56-57页 |
| ·Sf-9 细胞的悬浮适应 | 第57-58页 |
| ·Hi-5 细胞的培养 | 第58-62页 |
| ·仪器与材料 | 第58-59页 |
| ·实验方法与结果 | 第59-60页 |
| ·Hi-5 细胞的复苏及冻存 | 第59页 |
| ·Hi-5 细胞的有血清及无血清贴壁培养 | 第59-60页 |
| ·Hi-5 细胞的悬浮培养 | 第60-62页 |
| ·CHO 细胞的培养 | 第62-67页 |
| ·材料与仪器 | 第62页 |
| ·实验方法 | 第62-64页 |
| ·培养基的配制与除菌 | 第63页 |
| ·CHO 细胞的复苏 | 第63-64页 |
| ·CHO 细胞的冻存 | 第64页 |
| ·实验结果与讨论 | 第64-67页 |
| ·CHO 细胞的贴壁培养 | 第64-65页 |
| ·CHO 细胞的悬浮培养 | 第65-67页 |
| ·本章小结 | 第67页 |
| 参考文献 | 第67-70页 |
| 第三章 杆状病毒的扩增及重组人组织激肽释放酶原的表达 | 第70-86页 |
| ·引言 | 第70-72页 |
| ·重组杆状病毒的扩增 | 第72-77页 |
| ·仪器与试剂 | 第72-73页 |
| ·实验方法 | 第73-75页 |
| ·空斑试验 | 第73-74页 |
| ·重组杆状病毒的筛选和纯化 | 第74页 |
| ·重组杆状病毒的扩增 | 第74-75页 |
| ·重组杆状病毒的初步扩增 | 第74-75页 |
| ·重组杆状病毒的再扩增 | 第75页 |
| ·实验过程及结果 | 第75-77页 |
| ·重组杆状病毒的扩增 | 第75-77页 |
| ·重组杆状病毒的初步扩增 | 第76页 |
| ·重组杆状病毒的再扩增 | 第76-77页 |
| ·重组人组织激肽释放酶原的表达 | 第77-82页 |
| ·仪器与试剂 | 第77-78页 |
| ·实验方法 | 第78页 |
| ·ELISA 试验 | 第78页 |
| ·SDS-PAGE 测定 | 第78页 |
| ·实验过程与结果 | 第78-82页 |
| ·贴壁生长细胞的感染 | 第79页 |
| ·悬浮生长细胞的感染 | 第79-80页 |
| ·接种密度及 MOI 对重组人组织激肽释放酶原表达量的影响 | 第80-81页 |
| ·有血清和无血清培养上清液比较 | 第81-82页 |
| ·本章小结 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-86页 |
| 第四章 基因工程人组织激肽释放酶原的分离纯化及表征 | 第86-108页 |
| ·引言 | 第86-87页 |
| ·仪器与试剂 | 第87-88页 |
| ·实验方法 | 第88-89页 |
| ·DEAE－Sepharose FF 径向柱的填装 | 第88-89页 |
| ·Phenyl-Sepharose 6B、Sephacryl S-200 柱的填装 | 第89页 |
| ·Bio-HUK IgG 的制备 | 第89页 |
| ·结果与讨论 | 第89-97页 |
| ·DEAE-Sepharose FF 分离条件的影响 | 第89-95页 |
| ·洗脱模式的影响 | 第90-92页 |
| ·线性梯度洗脱 | 第90-91页 |
| ·台阶梯度分离 | 第91-92页 |
| ·不同缓冲液体系对分离的影响 | 第92-94页 |
| ·NaAc 缓冲体系 | 第92-93页 |
| ·PBS 缓冲体系 | 第93-94页 |
| ·pH 值对蛋白回收的影响 | 第94-95页 |
| ·Phenyl-Sepharose 6B 疏水层析 | 第95-96页 |
| ·Sephacryl S-200 分子筛色谱分离 | 第96-97页 |
| ·proHUK 的检测 | 第97-106页 |
| ·proHUK 的回收率测定 | 第97-98页 |
| ·proHUK 的SDS-PAGE 检测 | 第98-99页 |
| ·HPLC 纯度检测 | 第99页 |
| ·CIEF 检测 | 第99-100页 |
| ·HPLC-ESI-MS 检测 | 第100-103页 |
| ·氨基酸序列测试 | 第103-106页 |
| ·氨基酸含量测试结果 | 第103-104页 |
| ·N 端氨基酸测试结果 | 第104-106页 |
| ·本章小结 | 第106页 |
| 参考文献 | 第106-108页 |
| 第五章 基于人组织激肽释放酶的缺血性脑中风早期诊断试剂盒的研究 | 第108-138页 |
| ·引言 | 第108-111页 |
| ·开发脑中风早期诊断试剂盒的意义 | 第108-109页 |
| ·组织激肽释放酶与缺血性脑中风的相关性 | 第109-110页 |
| ·试剂盒原理 | 第110-111页 |
| ·人组织激肽释放酶酶联免疫吸附试验检测方法的优化 | 第111-123页 |
| ·仪器与试剂 | 第111-112页 |
| ·实验过程 | 第112-115页 |
| ·人组织激肽释放酶标准品的制备 | 第112-113页 |
| ·生物素标记的组织激肽释放酶抗体的制备 | 第113页 |
| ·人组织激肽释放酶特异性免疫吸附反应试验 | 第113-115页 |
| ·实验结果 | 第115-123页 |
| ·检测的线性范围、检测限及底物的选择 | 第115-118页 |
| ·底物反应终止时间的测定 | 第118-119页 |
| ·检测的精密度及准确度 | 第119-123页 |
| ·板内精密度 | 第119-120页 |
| ·板间精确度 | 第120-121页 |
| ·检测的准确性 | 第121-123页 |
| ·缺血性脑中风早期诊断试剂盒 | 第123-130页 |
| ·材料与试剂 | 第123页 |
| ·剂盒的装配工艺 | 第123-125页 |
| ·试剂盒组成 | 第123-124页 |
| ·试剂盒组装过程 | 第124-125页 |
| ·试剂盒的稳定性试验 | 第125-130页 |
| ·37℃稳定性实验 | 第125-128页 |
| ·吸光度值及线性关系 | 第125-127页 |
| ·37℃存放72 小时后试剂盒的板内精密度与准确性 | 第127-128页 |
| ·4℃稳定性实验 | 第128-130页 |
| ·吸光度值及线性关系 | 第129页 |
| ·4℃存放试剂盒的板内精密度与准确性 | 第129-130页 |
| ·试剂盒的应用 | 第130-133页 |
| ·本章小结 | 第133-134页 |
| 参考文献 | 第134-138页 |
| 附录 重组人组织激肽释放酶原的动物实验 | 第138-150页 |
| 作者简介及发表文章 | 第150-152页 |
| 致谢 | 第152页 |
