| 第一章 绪论 | 第1-41页 |
| ·研究目的和意义 | 第13页 |
| ·国内外研究现状 | 第13-40页 |
| ·启动子的一般结构特征 | 第14-20页 |
| ·植物组织特异性启动子分类 | 第20-27页 |
| ·植物组织特异表达cDNA克隆技术研究进展 | 第27-34页 |
| ·植物组织特异性启动子克隆技术研究进展 | 第34-37页 |
| ·植物启动子缺失突变方法研究进展 | 第37-38页 |
| ·报告基因研究进展 | 第38-39页 |
| ·瘤素(Nodulin)蛋白基因研究进展 | 第39页 |
| ·腺苷酸核糖基化作用因子1(arf1)基因研究进展 | 第39-40页 |
| ·真核生物转录本替换剪接现象研究进展 | 第40页 |
| ·本研究的研究内容和策略 | 第40-41页 |
| 第二章 棉花arf1基因上游侧翼序列染色体步移 | 第41-51页 |
| ·材料与方法 | 第41-43页 |
| ·DNA模板 | 第41页 |
| ·试剂 | 第41页 |
| ·PCR引物 | 第41页 |
| ·大肠杆菌克隆载体pUCm-T及其特征 | 第41-42页 |
| ·棉花基因组DNA提取方法-改良的CTAB法 | 第42-43页 |
| ·同尾酶反向PCR的基本原理 | 第43页 |
| ·Ⅱ-PCR的基本流程 | 第43-45页 |
| ·同尾酶的选择 | 第43页 |
| ·用一组同尾酶消化基因组DNA | 第43-44页 |
| ·高特异性反向PCR引物设计 | 第44页 |
| ·建立大体积、低浓度、变温的DNA环化连接体系 | 第44-45页 |
| ·设计高温、降落PCR扩增体系 | 第45页 |
| ·染色体连续步移 | 第45页 |
| ·结果与分析 | 第45-49页 |
| ·棉花arf1基因3'RACE和DNA扩增 | 第45页 |
| ·用Ⅱ-PCR获得arf1基因上游4924bp侧翼DNA序列 | 第45-49页 |
| ·讨论 | 第49-50页 |
| ·Ⅱ-PCR确保扩增结果的高度特异性 | 第49页 |
| ·Ⅱ-PCR大大拓宽了限制性内切酶的选择和应用 | 第49-50页 |
| ·Ⅱ-PCR具有广阔的应用前景 | 第50页 |
| ·小结 | 第50-51页 |
| 第三章 棉花Nodulin-like和arf1两个基因全长cDNA和启动子序列的分离 | 第51-65页 |
| ·材料与方法 | 第51-52页 |
| ·RNA模板 | 第51页 |
| ·试剂 | 第51页 |
| ·RT-PCR引物 | 第51页 |
| ·棉花RNA提取方法--改良的热硼酸法 | 第51-52页 |
| ·快速鉴定目的基因转录起始位点方法(RITIS)的基本原理 | 第52页 |
| ·RITIS实验流程 | 第52-54页 |
| ·植物目的基因EST序列的获得和3’RACE | 第52-53页 |
| ·基因组DNA序列的扩增 | 第53页 |
| ·用Ⅱ-PCR在染色体上多次快速步移得到足够长度的DNA序列 | 第53页 |
| ·5’端侧翼DNA外显子捕获 | 第53页 |
| ·cDNA 5’端RT-PCR步移 | 第53页 |
| ·ORF分析、内含子和外显子在基因组DNA上的定位 | 第53页 |
| ·转录起始位点RT-PCR标记 | 第53-54页 |
| ·转录起始位点在基因组上定位 | 第54页 |
| ·结果与分析 | 第54-63页 |
| ·arf1基因上游4924bp侧翼序列的生物信息学分析 | 第54-57页 |
| ·利用RITIS对棉花ARF1基因全长cDNA和启动子的分离以及替换剪接的发现 | 第57页 |
| ·用RITIS法进行棉花Nodulin-like基因全长cDNA及启动子的分离和定位 | 第57-60页 |
| ·Nodulin-like和arf1两个基因的内含子、外显子及其启动子在棉花染色体上的分布 | 第60-63页 |
| ·讨论 | 第63-64页 |
| ·RITIS是一种精确定位目的基因转录起始位点和快速扩增cDNA 5’末端的新策略 | 第63-64页 |
| ·RITIS在植物功能基因组研究中将具有广泛的应用价值 | 第64页 |
| ·小结 | 第64-65页 |
| 第四章 Nodulin-like和arf1基因遗传和表达分析 | 第65-74页 |
| ·材料与方法 | 第65-66页 |
| ·DNA模板 | 第65页 |
| ·RNA模板 | 第65页 |
| ·试剂 | 第65页 |
| ·PCR引物设计 | 第65页 |
| ·生物信息学分析工具 | 第65页 |
| ·Southern blot和Northern blot | 第65-66页 |
| ·结果与分析 | 第66-73页 |
| ·Nodulin-like蛋白的特性分析、结构预测及系统进化树的建立 | 第66页 |
| ·棉花Nodulin-like基因的拷贝数分析 | 第66-69页 |
| ·棉花Nodulin-like基因启动子表达特性分析 | 第69-70页 |
| ·ARF1蛋白的特性分析、结构预测及系统进化树的建立 | 第70页 |
| ·棉花arf1基因的拷贝数分析 | 第70-72页 |
| ·棉花arf1基因的表达分析 | 第72-73页 |
| ·讨论 | 第73页 |
| ·小结 | 第73-74页 |
| 第五章 棉花Nodulin-like和arf1启动子的结构特征、缺失突变和植物表达载体的构建 | 第74-85页 |
| ·材料和方法 | 第74-76页 |
| ·DNA模板 | 第74页 |
| ·试剂 | 第74页 |
| ·PCR引物设计 | 第74-75页 |
| ·植物表达载体及其特征 | 第75-76页 |
| ·Nodulin-like启动子的结构特征和片段缺失设计 | 第76-77页 |
| ·arf1启动子的结构特征和片段缺失设计 | 第77-78页 |
| ·Nodulin-like和arf1两个基因启动子片段缺失和植物表达载体的构建 | 第78-83页 |
| ·植物表达载体正确性鉴定 | 第83-84页 |
| ·小结 | 第84-85页 |
| 第六章 Nodulin-like和arf1两个基因启动子的功能鉴定 | 第85-100页 |
| ·材料和方法 | 第85-89页 |
| ·棉花转基因受体材料 | 第85页 |
| ·植物表达载体 | 第85页 |
| ·GUS基因PCR扩增和Southern blot分子检测的引物 | 第85页 |
| ·花粉管通道法(子房注射法)操作程序 | 第85-86页 |
| ·转基因植株的Kan筛选流程 | 第86页 |
| ·GUS基因的组织化学鉴定 | 第86页 |
| ·实验流程 | 第86-87页 |
| ·GUS基因表达与荧光定量分析 | 第87页 |
| ·GUS提取及荧光强度检测 | 第87-88页 |
| ·GUS提取液中蛋白含量测定 | 第88页 |
| ·GUS活性(G值)计算 | 第88-89页 |
| ·结果与分析 | 第89-96页 |
| ·棉花花粉管通道转化 | 第89页 |
| ·转基因后代筛选 | 第89页 |
| ·卡那霉素抗性植株的GUS基因PCR检测 | 第89-94页 |
| ·PCR阳性植株GUS组织化学分析 | 第94页 |
| ·PCR阳性植株GUS荧光定量分析 | 第94-96页 |
| ·GUS阳性植株的Southern blot | 第96页 |
| ·讨论 | 第96-98页 |
| ·花粉官通道技术的关键环节 | 第96-97页 |
| ·转基因植株田间鉴定、筛选 | 第97页 |
| ·各启动子的表达强度和表达谱 | 第97-98页 |
| ·棉花Nodulin-like和arf1两个启动子的应用价值 | 第98页 |
| ·小结 | 第98-100页 |
| 结论 | 第100-102页 |
| 本研究的创新点 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-117页 |
| 致谢 | 第117-118页 |
| 作者简历 | 第118页 |
