禽脑脊髓炎病毒Van Roekel株Vp0、Vp1、Vp3蛋白基因的克隆、表达与活性检测
| 1 前言 | 第1-11页 |
| ·病原学 | 第6-7页 |
| ·AEV的病毒结构与特性 | 第6页 |
| ·AEV的基因组 | 第6-7页 |
| ·流行病学 | 第7-8页 |
| ·临床病理学 | 第8页 |
| ·AE的诊断 | 第8-9页 |
| ·实验设计与技术路线 | 第9-11页 |
| ·实验设计 | 第9页 |
| ·技术路线 | 第9-11页 |
| 2 材料与方法 | 第11-18页 |
| ·材料 | 第11页 |
| ·种毒和种蛋 | 第11页 |
| ·菌种、质粒 | 第11页 |
| ·试剂 | 第11页 |
| ·主要仪器 | 第11页 |
| ·血清 | 第11页 |
| ·方法 | 第11-18页 |
| ·AEV-VR株的传代复壮 | 第11页 |
| ·引物设计合成 | 第11-12页 |
| ·AEV-VR株总RNA提取 | 第12页 |
| ·反转录 | 第12页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第12页 |
| ·cDNA克隆 | 第12-15页 |
| ·PCR产物回收 | 第12-13页 |
| ·cDNA与载体连接 | 第13页 |
| ·连接产物转化 | 第13页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第13页 |
| ·感受态细胞的转化 | 第13页 |
| ·阳性重组子的筛选与鉴定 | 第13-14页 |
| ·Kieser法质粒筛选 | 第13-14页 |
| ·重组质粒PCR鉴定 | 第14页 |
| ·重组质粒筛选与鉴定 | 第14-15页 |
| ·重组质粒的抽提 | 第14页 |
| ·酶切反应体系 | 第14-15页 |
| ·PCR扩增 | 第15页 |
| ·测序 | 第15页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第15页 |
| ·DNA与表达载体连接 | 第15页 |
| ·连接产物转化 | 第15页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第15页 |
| ·感受态细胞的转化 | 第15页 |
| ·重组表达质粒的筛选与鉴定 | 第15-16页 |
| ·重组表达质粒的抽提 | 第15-16页 |
| ·重组酶切鉴定 | 第16页 |
| ·PCR扩增 | 第16页 |
| ·VP0、VP1、VP3基因表达以及活性检测 | 第16-17页 |
| ·VP0、VP1、VP3基因表达 | 第16页 |
| ·大量表达蛋白及纯化 | 第16-17页 |
| ·蛋白活性检测 | 第17-18页 |
| ·包被ELISA板检测(自配试剂) | 第17页 |
| ·进口ELISA试剂盒对比检测 | 第17页 |
| ·自制ELISA VP1板活性检测(进口试剂) | 第17页 |
| ·琼脂扩散试验 | 第17-18页 |
| 3 结果 | 第18-27页 |
| 4 讨论 | 第27-28页 |
| 5 结论 | 第28-29页 |
| 致谢 | 第29-30页 |
| 参考文献 | 第30-33页 |
| 附图 | 第33-34页 |
