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番茄叶绿体抗氧化酶基因的克隆与遗传转化的研究

中文摘要第1-7页
英文摘要第7-9页
符号说明第9-11页
1 引言第11-23页
 1.1 活性氧的产生途径第11-12页
  1.1.1 自发的光氧化过程第12页
  1.1.2 Harber-Weiss反应第12页
  1.1.3 Ferlton反应第12页
  1.1.4 脂质过氧化作用第12页
  1.1.5 逆境胁迫第12页
 1.2 叶绿体内活性氧的产生的途径第12-13页
  1.2.1 类囊体途径第13页
  1.2.2 叶绿体基质途径第13页
  1.2.3 黄素脱氢酶途径第13页
 1.3 活性氧的作用及其氧化损伤第13-14页
  1.3.1 活性氧对植物的氧化损伤第13-14页
  1.3.2 活性氧的积极作用第14页
 1.4 清除活性氧的酶促系统第14-20页
  1.4.1 超氧化物歧化酶(SOD)第14-15页
  1.4.2 抗坏血酸过氧化物酶(APX)第15-19页
  1.4.3 过氧化氢酶(CAT)第19-20页
  1.4.4 谷胱甘肽还原酶(GR)第20页
 1.5 有关抗氧化酶系统的基因工程第20-22页
 1.6 本研究的目的和意义第22-23页
2 材料与方法第23-39页
 2.1 实验材料第23-24页
  2.1.1 植物材料第23页
  2.1.2 材料处理第23页
  2.1.3 菌株与质粒第23页
  2.1.4 酶及生化试剂第23页
  2.1.5 PCR引物第23-24页
 2.2 试验方法第24-39页
  2.2.1 生理指标测定第24-25页
   2.2.1.1 活性氧清除酶活性的测定第24-25页
  2.2.2 分子生物学方法第25-39页
   2.2.2.1 总RNA的提取第25-26页
   2.2.2.2 反转录第26-27页
   2.2.2.3 番茄类囊体APX基因片段的克隆第27-30页
   2.2.2.4 连接反应第30-31页
   2.2.2.5 感受态细胞的制备第31页
   2.2.2.6 转化第31-32页
   2.2.2.7 碱法小量提取质粒DNA第32-33页
   2.2.2.8 酶切鉴定第33页
   2.2.2.9 序列测定第33页
   2.2.2.10 正义APX基因表达载体的构建第33-34页
   2.2.2.11 根癌农杆菌LBA4404感受态细胞的制备、转化第34页
   2.2.2.12 农杆菌介导转化烟草第34-35页
   2.2.2.13 转基因烟草的分子鉴定第35-37页
   2.2.2.14 番茄叶绿体Cu/Zrl一SOD基因的分离第37-39页
3 结果与分析第39-52页
 3.1 低温对番茄叶片活性氧清除酶活性影响第39-40页
 3.2 类囊体结合型APX基因片段的克隆第40-50页
  3.2.1 中间片段的克隆第40-41页
  3.2.2 APX基因5’端片段的分离第41-42页
  3.2.3 APX基因3’端的克隆第42-43页
  3.3.4 APX基因全长的克隆第43-48页
  3.2.5 正义APX基因表达载体的构建第48-49页
  3.2.6 转基因植株的APX酶活性的测定第49-50页
 3.3 叶绿体Cu/Z11一SOD基因全长的克隆和序列分析第50-52页
  3.3.1 叶绿体Cu/Zn-SOD基因全长的克隆第50-51页
  3.3.2 序列分析第51-52页
4 讨论第52-55页
 4.1 低温胁迫对番茄叶片活性氧代谢的影响第52页
 4.2 类囊体膜tAPX与基质sAPX的氨基酸序列分析第52-53页
 4.3 有关SOD基因功能第53-54页
 4.4 展望第54-55页
 4.5 进一步研究的设想第55页
5. 结论第55-57页
参考文献第57-67页
附录第67-68页
致谢第68-69页
攻读学位期间发表论文情况第69页

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