中文摘要 | 第1-7页 |
英文摘要 | 第7-9页 |
符号说明 | 第9-11页 |
1 引言 | 第11-23页 |
1.1 活性氧的产生途径 | 第11-12页 |
1.1.1 自发的光氧化过程 | 第12页 |
1.1.2 Harber-Weiss反应 | 第12页 |
1.1.3 Ferlton反应 | 第12页 |
1.1.4 脂质过氧化作用 | 第12页 |
1.1.5 逆境胁迫 | 第12页 |
1.2 叶绿体内活性氧的产生的途径 | 第12-13页 |
1.2.1 类囊体途径 | 第13页 |
1.2.2 叶绿体基质途径 | 第13页 |
1.2.3 黄素脱氢酶途径 | 第13页 |
1.3 活性氧的作用及其氧化损伤 | 第13-14页 |
1.3.1 活性氧对植物的氧化损伤 | 第13-14页 |
1.3.2 活性氧的积极作用 | 第14页 |
1.4 清除活性氧的酶促系统 | 第14-20页 |
1.4.1 超氧化物歧化酶(SOD) | 第14-15页 |
1.4.2 抗坏血酸过氧化物酶(APX) | 第15-19页 |
1.4.3 过氧化氢酶(CAT) | 第19-20页 |
1.4.4 谷胱甘肽还原酶(GR) | 第20页 |
1.5 有关抗氧化酶系统的基因工程 | 第20-22页 |
1.6 本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
2 材料与方法 | 第23-39页 |
2.1 实验材料 | 第23-24页 |
2.1.1 植物材料 | 第23页 |
2.1.2 材料处理 | 第23页 |
2.1.3 菌株与质粒 | 第23页 |
2.1.4 酶及生化试剂 | 第23页 |
2.1.5 PCR引物 | 第23-24页 |
2.2 试验方法 | 第24-39页 |
2.2.1 生理指标测定 | 第24-25页 |
2.2.1.1 活性氧清除酶活性的测定 | 第24-25页 |
2.2.2 分子生物学方法 | 第25-39页 |
2.2.2.1 总RNA的提取 | 第25-26页 |
2.2.2.2 反转录 | 第26-27页 |
2.2.2.3 番茄类囊体APX基因片段的克隆 | 第27-30页 |
2.2.2.4 连接反应 | 第30-31页 |
2.2.2.5 感受态细胞的制备 | 第31页 |
2.2.2.6 转化 | 第31-32页 |
2.2.2.7 碱法小量提取质粒DNA | 第32-33页 |
2.2.2.8 酶切鉴定 | 第33页 |
2.2.2.9 序列测定 | 第33页 |
2.2.2.10 正义APX基因表达载体的构建 | 第33-34页 |
2.2.2.11 根癌农杆菌LBA4404感受态细胞的制备、转化 | 第34页 |
2.2.2.12 农杆菌介导转化烟草 | 第34-35页 |
2.2.2.13 转基因烟草的分子鉴定 | 第35-37页 |
2.2.2.14 番茄叶绿体Cu/Zrl一SOD基因的分离 | 第37-39页 |
3 结果与分析 | 第39-52页 |
3.1 低温对番茄叶片活性氧清除酶活性影响 | 第39-40页 |
3.2 类囊体结合型APX基因片段的克隆 | 第40-50页 |
3.2.1 中间片段的克隆 | 第40-41页 |
3.2.2 APX基因5’端片段的分离 | 第41-42页 |
3.2.3 APX基因3’端的克隆 | 第42-43页 |
3.3.4 APX基因全长的克隆 | 第43-48页 |
3.2.5 正义APX基因表达载体的构建 | 第48-49页 |
3.2.6 转基因植株的APX酶活性的测定 | 第49-50页 |
3.3 叶绿体Cu/Z11一SOD基因全长的克隆和序列分析 | 第50-52页 |
3.3.1 叶绿体Cu/Zn-SOD基因全长的克隆 | 第50-51页 |
3.3.2 序列分析 | 第51-52页 |
4 讨论 | 第52-55页 |
4.1 低温胁迫对番茄叶片活性氧代谢的影响 | 第52页 |
4.2 类囊体膜tAPX与基质sAPX的氨基酸序列分析 | 第52-53页 |
4.3 有关SOD基因功能 | 第53-54页 |
4.4 展望 | 第54-55页 |
4.5 进一步研究的设想 | 第55页 |
5. 结论 | 第55-57页 |
参考文献 | 第57-67页 |
附录 | 第67-68页 |
致谢 | 第68-69页 |
攻读学位期间发表论文情况 | 第69页 |