| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-8页 |
| 绪论 | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-24页 |
| 1．1 包涵体的形成 | 第10-11页 |
| 1．2 包涵体复性过程 | 第11-16页 |
| 1．2．1 包涵体的分离 | 第11-12页 |
| 1．2．2 包涵体的溶解 | 第12-13页 |
| 1．2．3 包涵体的复性 | 第13-15页 |
| 1．2．4 蛋白质复性后的检测 | 第15-16页 |
| 1．3 分子伴侣协助的包涵体复性 | 第16-19页 |
| 1．3．1 分子伴侣的概念 | 第16-17页 |
| 1．3．2 分子伴侣协助复性应用 | 第17-18页 |
| 1．3．3 分子伴侣协助复性的机理 | 第18-19页 |
| 1．4 小分子伴侣 | 第19-22页 |
| 1．4．1 小分子伴侣简介 | 第19-21页 |
| 1．4．2 小分子伴侣的结构 | 第21-22页 |
| 1．4．3 小分子伴侣协助蛋白质复性的研究 | 第22页 |
| 1．5 本文的研究内容 | 第22-24页 |
| 第二章 质粒转化及菌种筛选 | 第24-30页 |
| 2．1 实验材料和仪器 | 第25-26页 |
| 2．1．1 质粒和菌株 | 第25页 |
| 2．1．2 培养基 | 第25页 |
| 2．1．3 溶液 | 第25-26页 |
| 2．1．4 实验仪器 | 第26页 |
| 2．2 实验方法 | 第26-27页 |
| 2．2．1 质粒抽提 | 第26页 |
| 2．2．2 感受态细胞的制备 | 第26页 |
| 2．2．3 质粒转化 | 第26-27页 |
| 2．2．4 转化子筛选 | 第27页 |
| 2．2．5 菌种保存 | 第27页 |
| 2．3 实验结果及讨论 | 第27-29页 |
| 2．3．1 宿主细胞的选择 | 第27-28页 |
| 2．3．2 菌种的筛选 | 第28页 |
| 2．3．3 转化成功的检测 | 第28-29页 |
| 2．4 小结 | 第29-30页 |
| 第三章 重组大肠杆菌BL21发酵过程研究 | 第30-46页 |
| 3．1 实验材料和仪器 | 第30-31页 |
| 3．1．1 菌种 | 第30页 |
| 3．1．2 培养基 | 第30-31页 |
| 3．1．3 实验仪器 | 第31页 |
| 3．2 分析方法 | 第31-32页 |
| 3．2．1 考马斯亮兰法测蛋白质浓度 | 第31页 |
| 3．2．2 细胞生长测定 | 第31-32页 |
| 3．2．3 小分子伴侣表达量测定 | 第32页 |
| 3．3 实验方法 | 第32页 |
| 3．4 实验结果与讨论 | 第32-44页 |
| 3．4．1 种子培养基的选择 | 第32-33页 |
| 3．4．2 基本发酵培养基的选择 | 第33-34页 |
| 3．4．3 基本培养条件的确定 | 第34-35页 |
| 3．4．4 培养基的优化 | 第35-37页 |
| 3．4．5 种龄和接种量对发酵的影响 | 第37-39页 |
| 3．4．6 渗透压对目标蛋白表达的影响 | 第39页 |
| 3．4．7 温度对表达的影响 | 第39-40页 |
| 3．4．8 溶氧量对蛋白质表达的影响 | 第40-41页 |
| 3．4．9 诱导条件 | 第41-44页 |
| 3．4．10 优化后的目标蛋白表达情况 | 第44页 |
| 3．5 小结 | 第44-46页 |
| 第四章 小分子伴侣蛋白的纯化 | 第46-56页 |
| 4．1 实验材料和仪器 | 第46-47页 |
| 4．1．1 缓冲溶液 | 第46页 |
| 4．1．2 凝胶 | 第46页 |
| 4．1．3 主要实验仪器 | 第46-47页 |
| 4．2 实验方法 | 第47-48页 |
| 4．2．1 细胞离心破碎 | 第47页 |
| 4．2．2 亲和层析 | 第47页 |
| 4．2．3 凝胶层析 | 第47页 |
| 4．2．4 收率的计算 | 第47-48页 |
| 4．2．5 质谱法测定小分子伴侣分子量 | 第48页 |
| 4．3 实验结果及讨论 | 第48-55页 |
| 4．3．1 细胞破碎条件 | 第48页 |
| 4．3．2 亲和层析条件摸索 | 第48-52页 |
| 4．3．3 亲和层析条件的确定 | 第52-54页 |
| 4．3．4 质谱法确定小分子伴侣分子量 | 第54-55页 |
| 4．4 小结 | 第55-56页 |
| 第五章 分子伴侣协助γ-干扰素体外复性的初步研究 | 第56-66页 |
| 5．1 实验材料和仪器 | 第56-57页 |
| 5．1．1 人γ-干扰素菌种 | 第56页 |
| 5．1．2 包涵体复性中所用溶液 | 第56页 |
| 5．1．3 细胞治病效应抑制微量测定法所用培养基和溶液 | 第56-57页 |
| 5．1．4 主要实验仪器 | 第57页 |
| 5．2 重折叠γ-干扰素的活性检测方法 | 第57-60页 |
| 5．2．1 攻击病毒VSV的扩增 | 第57页 |
| 5．2．2 VSV效价滴定 | 第57-58页 |
| 5．2．3 细胞致病效应（CPE）抑制微量测定法 | 第58-59页 |
| 5．2．4 IFN-γ效价计算方法 | 第59-60页 |
| 5．3 实验方法 | 第60-61页 |
| 5．3．1 γ-干扰素包涵体的制备 | 第60页 |
| 5．3．2 包涵体的洗涤与纯化 | 第60页 |
| 5．3．3 包涵体的化学变性溶解 | 第60-61页 |
| 5．3．4 包涵体的游离复性 | 第61页 |
| 5．4 实验结果和讨论 | 第61-65页 |
| 5．4．1 包涵体的制备 | 第61-62页 |
| 5．4．2 包涵体的洗涤和纯化 | 第62-63页 |
| 5．4．3 包涵体的溶解 | 第63页 |
| 5．4．4 IFN-γ包涵体在游离小分子伴侣协助下的复性 | 第63-65页 |
| 5．5 小结 | 第65-66页 |
| 结论 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 致谢 | 第73页 |