中文摘要 | 第1-4页 |
英文摘要 | 第4-8页 |
1 前言 | 第8-24页 |
1.1 白桦简介 | 第8-9页 |
1.1.1 白桦的分类地位 | 第8页 |
1.1.2 白桦地理分布 | 第8页 |
1.1.3 白桦的经济作用 | 第8页 |
1.1.4 白桦转基因研究的意义 | 第8-9页 |
1.2 植物基因工程概述 | 第9-16页 |
1.2.1 植物基因工程特点 | 第9-10页 |
1.2.2 用于植物基因转移的目的基因 | 第10-13页 |
1.2.2.1 植物基因转移常用目的基因 | 第10页 |
1.2.2.2 用于抗虫转基因的目的基因 | 第10-13页 |
1.2.3 植物基因转移方法 | 第13-14页 |
1.2.3.1 以农杆菌为介导的基因转移 | 第13页 |
1.2.3.2 以原生质体为受体的基因转移 | 第13页 |
1.2.3.3 以细胞为受体的基因转移 | 第13页 |
1.2.3.4 基因枪法 | 第13-14页 |
1.2.3.5 种质系统介导法 | 第14页 |
1.2.4 影响植物基因转移的因素 | 第14页 |
1.2.5 转基因植物的验证 | 第14-15页 |
1.2.5.1 模式转化系统 | 第15页 |
1.2.5.2 目的基因转化系统 | 第15页 |
1.2.6 外源基因在转基因植物中的命运 | 第15-16页 |
1.3 植物基因工程研究进展 | 第16-18页 |
1.3.1 植物基因工程进展 | 第16-17页 |
1.3.2 植物基因工程产生的经济效益 | 第17页 |
1.3.3 植物基因工程存在的问题 | 第17-18页 |
1.4 林木遗传转化概况 | 第18-24页 |
1.4.1 木本植物遗传转化的特殊性 | 第18页 |
1.4.2 木本植物遗传转化受体系统及方法 | 第18-20页 |
1.4.2.1 受伤植物器官的直接感染 | 第18-19页 |
1.4.2.2 整体植株接种共感染 | 第19页 |
1.4.2.3 体细胞胚或胚性细胞的转化 | 第19页 |
1.4.2.4 原生质体的转化 | 第19-20页 |
1.4.2.5 附体腋芽转化 | 第20页 |
1.4.2.6 农杆菌介导与基因枪结合共转化 | 第20页 |
1.4.3 影响木本植物遗传转化因素的探讨 | 第20-22页 |
1.4.3.1 vir基因的活化 | 第20-21页 |
1.4.3.2 外植体的预培养 | 第21页 |
1.4.3.3 共培养时间与方法 | 第21页 |
1.4.3.4 共培养基中激素的影响 | 第21页 |
1.4.3.5 选择抗生素与除菌抗生素的影响 | 第21-22页 |
1.4.3.6 褐化及玻璃苗现象 | 第22页 |
1.4.4 木本植物遗传转化成果 | 第22-24页 |
2 研究内容、材料与方法 | 第24-34页 |
2.1 白桦抗虫转基因受体系统的研究 | 第24页 |
2.2 农杆菌介导遗传转化系统的建立 | 第24-25页 |
2.2.1 研究材料 | 第24页 |
2.2.2 研究内容 | 第24页 |
2.2.3 研究方法 | 第24-25页 |
2.3 转基因植株生根 | 第25页 |
2.4 转基因植株GUS活性检测 | 第25-26页 |
2.4.1 GUS检测的原理 | 第25页 |
2.4.2 检测方法 | 第25-26页 |
2.4.3 GUS检测液配方 | 第26页 |
2.5 白桦转基因试管苗基因组DNA提取与纯化及质粒DNA的提取与纯化 | 第26-28页 |
2.5.1 白桦转基因试管苗基因组DNA提取及纯化 | 第26-27页 |
2.5.2 质粒的提取及纯化 | 第27-28页 |
2.6 转基因植株nptⅡ基因的PCR检测 | 第28页 |
2.7 转基因植株目的基因(蜘蛛杀虫肽基因)的PCR检测 | 第28页 |
2.8 转基因植株目的基因(融合基因)的PCR检测 | 第28-29页 |
2.9 转基因苗Southern点杂交 | 第29-31页 |
2.9.1 杂交探针的制备 | 第29-30页 |
2.9.1.1 质粒双酶切及酶切片段的回收 | 第29页 |
2.9.1.2 探针标定 | 第29-30页 |
2.9.2 白桦转基因植株Southern点杂交 | 第30-31页 |
2.10 转基因植株Southern印迹杂交 | 第31-32页 |
2.10.1 白桦基因组DNA双酶切 | 第31页 |
2.10.2 毛细管吸印法进行转膜 | 第31-32页 |
2.10.3 膜上印迹杂交 | 第32页 |
2.11 转基因植株Northern点杂交 | 第32-33页 |
2.11.1 转基因植株总RNA的提取 | 第32页 |
2.11.2 Northern点杂交 | 第32-33页 |
2.12 转基因植株杀虫实验 | 第33-34页 |
3 结果与分析 | 第34-46页 |
3.1 农杆菌介导的白桦抗虫转基因研究 | 第34-36页 |
3.2 白桦转基因植株生根 | 第36-37页 |
3.3 转基因植株的检测 | 第37-43页 |
3.3.1 gus基因表达的检测 | 第37页 |
3.3.2 外源基因的PCR检测 | 第37-40页 |
3.3.2.1 白桦基因组DNA的提取、质粒的提取及质粒双酶切 | 第37-39页 |
3.3.2.2 PCR检测 | 第39-40页 |
3.3.3 分子杂交 | 第40-43页 |
3.3.3.1 Southern斑点杂交 | 第40-41页 |
3.3.3.2 基因组DNA双酶切及印迹杂交 | 第41-42页 |
3.3.3.3 转基因苗目的基因(融合基因)PCR Southern杂交 | 第42页 |
3.3.3.4 转基因植株Northern检测 | 第42-43页 |
3.4 转基因植株杀虫实验 | 第43-46页 |
3.4.1 转基因植株对舞毒蛾幼虫的毒杀能力 | 第44-45页 |
3.4.2 转基因植株对舞毒蛾幼虫生长的影响 | 第45页 |
3.4.3 转基因植株对舞毒蛾幼虫发育的影响 | 第45-46页 |
4 结论 | 第46-47页 |
5 讨论与建议 | 第47-50页 |
参考文献 | 第50-54页 |
致谢 | 第54-55页 |
图版 | 第55-58页 |
图版说明 | 第58页 |