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白桦抗虫基因遗传转化研究及转基因植株的抗虫性

中文摘要第1-4页
英文摘要第4-8页
1 前言第8-24页
 1.1 白桦简介第8-9页
  1.1.1 白桦的分类地位第8页
  1.1.2 白桦地理分布第8页
  1.1.3 白桦的经济作用第8页
  1.1.4 白桦转基因研究的意义第8-9页
 1.2 植物基因工程概述第9-16页
  1.2.1 植物基因工程特点第9-10页
  1.2.2 用于植物基因转移的目的基因第10-13页
   1.2.2.1 植物基因转移常用目的基因第10页
   1.2.2.2 用于抗虫转基因的目的基因第10-13页
  1.2.3 植物基因转移方法第13-14页
   1.2.3.1 以农杆菌为介导的基因转移第13页
   1.2.3.2 以原生质体为受体的基因转移第13页
   1.2.3.3 以细胞为受体的基因转移第13页
   1.2.3.4 基因枪法第13-14页
   1.2.3.5 种质系统介导法第14页
  1.2.4 影响植物基因转移的因素第14页
  1.2.5 转基因植物的验证第14-15页
   1.2.5.1 模式转化系统第15页
   1.2.5.2 目的基因转化系统第15页
  1.2.6 外源基因在转基因植物中的命运第15-16页
 1.3 植物基因工程研究进展第16-18页
  1.3.1 植物基因工程进展第16-17页
  1.3.2 植物基因工程产生的经济效益第17页
  1.3.3 植物基因工程存在的问题第17-18页
 1.4 林木遗传转化概况第18-24页
  1.4.1 木本植物遗传转化的特殊性第18页
  1.4.2 木本植物遗传转化受体系统及方法第18-20页
   1.4.2.1 受伤植物器官的直接感染第18-19页
   1.4.2.2 整体植株接种共感染第19页
   1.4.2.3 体细胞胚或胚性细胞的转化第19页
   1.4.2.4 原生质体的转化第19-20页
   1.4.2.5 附体腋芽转化第20页
   1.4.2.6 农杆菌介导与基因枪结合共转化第20页
  1.4.3 影响木本植物遗传转化因素的探讨第20-22页
   1.4.3.1 vir基因的活化第20-21页
   1.4.3.2 外植体的预培养第21页
   1.4.3.3 共培养时间与方法第21页
   1.4.3.4 共培养基中激素的影响第21页
   1.4.3.5 选择抗生素与除菌抗生素的影响第21-22页
   1.4.3.6 褐化及玻璃苗现象第22页
  1.4.4 木本植物遗传转化成果第22-24页
2 研究内容、材料与方法第24-34页
 2.1 白桦抗虫转基因受体系统的研究第24页
 2.2 农杆菌介导遗传转化系统的建立第24-25页
  2.2.1 研究材料第24页
  2.2.2 研究内容第24页
  2.2.3 研究方法第24-25页
 2.3 转基因植株生根第25页
 2.4 转基因植株GUS活性检测第25-26页
  2.4.1 GUS检测的原理第25页
  2.4.2 检测方法第25-26页
  2.4.3 GUS检测液配方第26页
 2.5 白桦转基因试管苗基因组DNA提取与纯化及质粒DNA的提取与纯化第26-28页
  2.5.1 白桦转基因试管苗基因组DNA提取及纯化第26-27页
  2.5.2 质粒的提取及纯化第27-28页
 2.6 转基因植株nptⅡ基因的PCR检测第28页
 2.7 转基因植株目的基因(蜘蛛杀虫肽基因)的PCR检测第28页
 2.8 转基因植株目的基因(融合基因)的PCR检测第28-29页
 2.9 转基因苗Southern点杂交第29-31页
  2.9.1 杂交探针的制备第29-30页
   2.9.1.1 质粒双酶切及酶切片段的回收第29页
   2.9.1.2 探针标定第29-30页
  2.9.2 白桦转基因植株Southern点杂交第30-31页
 2.10 转基因植株Southern印迹杂交第31-32页
  2.10.1 白桦基因组DNA双酶切第31页
  2.10.2 毛细管吸印法进行转膜第31-32页
  2.10.3 膜上印迹杂交第32页
 2.11 转基因植株Northern点杂交第32-33页
  2.11.1 转基因植株总RNA的提取第32页
  2.11.2 Northern点杂交第32-33页
 2.12 转基因植株杀虫实验第33-34页
3 结果与分析第34-46页
 3.1 农杆菌介导的白桦抗虫转基因研究第34-36页
 3.2 白桦转基因植株生根第36-37页
 3.3 转基因植株的检测第37-43页
  3.3.1 gus基因表达的检测第37页
  3.3.2 外源基因的PCR检测第37-40页
   3.3.2.1 白桦基因组DNA的提取、质粒的提取及质粒双酶切第37-39页
   3.3.2.2 PCR检测第39-40页
  3.3.3 分子杂交第40-43页
   3.3.3.1 Southern斑点杂交第40-41页
   3.3.3.2 基因组DNA双酶切及印迹杂交第41-42页
   3.3.3.3 转基因苗目的基因(融合基因)PCR Southern杂交第42页
   3.3.3.4 转基因植株Northern检测第42-43页
 3.4 转基因植株杀虫实验第43-46页
  3.4.1 转基因植株对舞毒蛾幼虫的毒杀能力第44-45页
  3.4.2 转基因植株对舞毒蛾幼虫生长的影响第45页
  3.4.3 转基因植株对舞毒蛾幼虫发育的影响第45-46页
4 结论第46-47页
5 讨论与建议第47-50页
参考文献第50-54页
致谢第54-55页
图版第55-58页
图版说明第58页

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