| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-8页 |
| 引 言 | 第8页 |
| 1． 抗病毒植物基因工程 | 第8-14页 |
| 1．1 抗病毒植物基因工程策略及应用现状 | 第8-11页 |
| 1．1．1 植物病毒来源的基因介导抗病性 | 第9-11页 |
| 1．1．1．1 外壳蛋白基因策略（coat protein-mediated resistance，CPMR） | 第9页 |
| 1．1．1．2 复制酶基因策略（replicase-mediated protection，RPMP） | 第9-10页 |
| 1．1．1．3 运动蛋白策略（movement protein-mediated resistance，MPMR） | 第10页 |
| 1．1．1．4 其它病毒基因介导的抗性策略 | 第10页 |
| 1．1．1．5 其它抗病毒策略 | 第10页 |
| 1．1．1．6 反义RNA（antisense RNA）策略 | 第10页 |
| 1．1．1．7 卫星RNA（satellite RNAs，sat-RNA）和缺陷干扰型RNA（defdctive interfdring RNA，DI RNA）策略 | 第10-11页 |
| 1．2 植物病毒来源的基因介导抗病性的机制 | 第11-13页 |
| 1．2．1 蛋白水平介导抗性的潜在机制 | 第11-12页 |
| 1．2．2 RNA水平上介导抗性的潜在机制 | 第12-13页 |
| 1．3 抗病毒植物基因工程存在的问题 | 第13-14页 |
| 1．3．1 抗病性及其遗传稳定性 | 第13页 |
| 1．3．2 安全性 | 第13页 |
| 1．3．3 抗病机制的复杂性 | 第13-14页 |
| 1．4 抗病毒基因工程展望 | 第14页 |
| 2． POTYVIRUS 6KD-NIA的分子生物学研究进展 | 第14-19页 |
| 2．1 Potyvirus病毒的基因组结构和功能 | 第14-15页 |
| 2．2 Potyvirus 6kD-NIa的生物学活性 | 第15-18页 |
| 2．2．1 多聚蛋白加工 | 第15-16页 |
| 2．2．2 参与基因组的复制 | 第16-18页 |
| 2．2．2．1 NIa序列非特异的RNA结合活性 | 第17页 |
| 2．2．2．2 NIa富集NIb的功能 | 第17页 |
| 2．2．2．3 VPg起始病毒RNA的合成 | 第17页 |
| 2．2．2．4 NIa的亚细胞运输活性 | 第17页 |
| 2．2．2．5 6kD的锚定作用和对NIa核定位功能的影响 | 第17页 |
| 2．2．3 VPg促进病毒的运动与传播 | 第17-18页 |
| 2．3 Potyvirus NIa介导的抗病性的研究现状 | 第18-19页 |
| 2．3．1 NIa介导的抗性特点 | 第18页 |
| 2．3．2 抗性遗传规律的研究 | 第18-19页 |
| 2．3．3 NIa介导的抗病性机制的探索 | 第19页 |
| 3． 本实验研究的背景、内容、目的和意义 | 第19-20页 |
| 实验部分 | 第20页 |
| 1． 马铃薯Y病毒（PVY）NIa蛋白酶的原核表达及其抗血制备 | 第20-28页 |
| 1．1 材料 | 第20页 |
| 1．1．1 菌株和质粒 | 第20页 |
| 1．1．2 植物材料和毒源 | 第20页 |
| 1．1．3 培养基和试剂 | 第20页 |
| 1．1．4 引物 | 第20页 |
| 1．2 方法 | 第20-24页 |
| 1．2．1 基本的分子生物学方法 | 第20-22页 |
| 1．2．1．1 质粒的小量制备 | 第20页 |
| 1．2．1．2 核酸琼脂糖凝胶电 | 第20-21页 |
| 1．2．1．3 PCR扩增、酶切和连接反应 | 第21页 |
| 1．2．1．4 E．coli感受态制备及转化 | 第21-22页 |
| 1．2．1．5 菌种保藏 | 第22页 |
| 1．2．2 融合表达载体的构建及IPTG诱导 | 第22-23页 |
| 1．2．3 VPg融合蛋白的纯化 | 第23页 |
| 1．2．4 VPg抗血清的制备及效价测定 | 第23页 |
| 1．2．5 感染PVY病毒的植物的Western blot分析 | 第23-24页 |
| 1．3 结果与分析 | 第24-25页 |
| 1．3．1 pET-6KNIa和pET-VPg原核表达载体的构建 | 第24-25页 |
| 1．3．2 pET-6KNIa和pET-VPg在E．coli中的表达 | 第25页 |
| 1．3．3 抗血清的效价测定及Westen blot分析 | 第25页 |
| 1．4 讨论 | 第25-28页 |
| 2． 表达PVY-C 6KD-NIA转基因烟草的抗病性研究 | 第28-45页 |
| 2．1 材料 | 第28页 |
| 2．1．1 质粒与菌株 | 第28页 |
| 2．1．2 植物材料和毒源 | 第28页 |
| 2．1．3 试剂 | 第28页 |
| 2．1．4 PCR引物 | 第28页 |
| 2．2 方法 | 第28-32页 |
| 2．2．1 攻毒试验 | 第28-29页 |
| 2．2．2 酶联免疫吸附检测（ELISA） | 第29页 |
| 2．2．3 转基因烟草的总DNA提取 | 第29页 |
| 2．2．4 转基因烟草的PCR检测 | 第29页 |
| 2．2．5 转基因烟草的Southern blot分析 | 第29-31页 |
| 2．2．6 转基因烟草的Western blot分析 | 第31页 |
| 2．2．7 转基因蛋白表达量的测定 | 第31-32页 |
| 2．3 结果与分析 | 第32-45页 |
| 2．3．1 转基因烟草的抗病性试验 | 第32-37页 |
| 2．3．2 T_2、T_3代转基因烟草的PCR检测 | 第37-38页 |
| 2．3．4 转基因烟草的Western blot检测 | 第38-40页 |
| 2．3．5 转基因在烟草中表达量的测定 | 第40-45页 |
| 2．3．5．1 接种前转基因表达的定量分析 | 第40页 |
| 2．3．5．2 接种后转基因表达的定量分析 | 第40-45页 |
| 结 论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 附录 | 第52-56页 |
| 致 谢 | 第56页 |
