摘要 | 第1-9页 |
摘要(英文) | 第9-12页 |
前言 | 第12-15页 |
材料和方法 | 第15-27页 |
一.细胞培养 | 第15-18页 |
二.软琼脂培养 | 第18页 |
三.~3H-胸腺嘧啶掺入试验 | 第18页 |
四.NGF的受体研究 | 第18-21页 |
1.~(125)Ⅰ-NGF的制备 | 第18-19页 |
2.~(125)Ⅰ-NGF结合试验(Scatchard分析) | 第19-20页 |
3.NGF受体的亲和标记和化学交联 | 第20页 |
4.交联受体的免疫沉淀 | 第20页 |
5.用流式细胞仪检测萤光标记单抗特异结合的细胞膜表面NGF受体 | 第20-21页 |
五.分子杂交 | 第21-24页 |
1.RNA提取及Northern Blotting | 第21页 |
2.细胞DNA的提取及Southern Blotting | 第21-22页 |
3.cDNA探针的制备 | 第22-24页 |
a.Competent细菌的制备及转化 | 第22页 |
b.cDNA探针的扩增及鉴定 | 第22-24页 |
c.cDNA探针的标记 | 第24页 |
4.RNA-DNA杂交(Northern)及DNA-DAN杂交(Southern) | 第24页 |
六.DNA Fingerprinting | 第24-25页 |
七.逆转录病毒载体的构建及NGF受体基因重组 | 第25页 |
八.转化系的建立 | 第25-27页 |
实验结果: | 第27-45页 |
第一部分:NGF及其受体对人神经母细胞瘤系神经上皮瘤系细胞分化的影响 | 第27-43页 |
一.NGF诱导神经母细胞瘤及神经上皮瘤细胞的分化 | 第27-37页 |
1.DNA Fingerpriting | 第27页 |
2.细胞系对NGF的反应 | 第27-29页 |
3.神经标志物mRNA在神经源性肿瘤细胞系中的表达及NGF对表达的影响 | 第29-33页 |
4.NGF受体和EGF受体mRNA在神经源性肿瘤细胞系中的表达及NGF对表达的影响 | 第33页 |
5.NGF对瘤细胞生长的影响 | 第33-35页 |
6.HGF受体研究 | 第35-37页 |
1) 细胞膜HGF受体与,~(125)Ⅰ-NGF结合试验 | 第35页 |
2) 神经母细胞瘤系及神经上皮瘤系中的HGF受体的生化特点 | 第35-37页 |
7.N-myc癌基因扩增与否的检测 | 第37页 |
二.NGF诱导分化的神经母细胞瘤细胞中癌基因表达的变化 | 第37-39页 |
1.c-myc癌基因在神经源性肿瘤细胞系中的表达及与NGF诱导分化的关系 | 第37页 |
2.N-myc在神经源性肿瘤细胞中的表达及其NGF对表达的影响 | 第37-39页 |
3.神经源性肿瘤细胞系中其它癌基因的表达及其NGF对表达的影响 | 第39页 |
三.重组NGFR基因在NGFR缺乏的神经母细胞瘤系中的表达及其NGF对转化细胞的分化作用 | 第39-43页 |
1.转化细胞系的特点和与其母系的比较 | 第39页 |
2.转化细胞系中重组HGFR的表达 | 第39-42页 |
3.NGF对转化细胞系基因表达及细胞生长分化的影响 | 第42-43页 |
第二部分:EGF对人癌细胞生长的影响 | 第43-45页 |
讨论: | 第45-51页 |
一.NGF诱导人神经母细胞瘤系和神经上皮瘤系的规律和特点 | 第45-49页 |
二.EGF对人癌细胞生长的影响 | 第49-51页 |
结论 | 第51-52页 |
附图 | 第52-95页 |
参考文献 | 第95-107页 |
文献综述及文献 | 第107-126页 |
附录:已发表与论文有关的文章题录 | 第126-128页 |
致谢 | 第128页 |