| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-20页 |
| 1 引言 | 第10-20页 |
| ·锥虫和锥虫病的简介 | 第10页 |
| ·锥虫的变异表面糖蛋白(VSG) | 第10-12页 |
| ·目前伊氏锥虫病诊断研究进展 | 第12-18页 |
| ·病原学检查 | 第13页 |
| ·免疫学诊断 | 第13-17页 |
| ·分子生物学诊断 | 第17-18页 |
| ·优势变异体基因重组抗原作为伊氏锥虫病诊断抗原的研究进展与应用前景 | 第18-19页 |
| ·伊氏锥虫病诊断技术展望 | 第19-20页 |
| 第二章 伊氏锥虫pGEX-4T-ShTat1.2VSG重组质粒的构建与表达 | 第20-38页 |
| 1 材料与方法 | 第20-31页 |
| ·试验材料和试剂 | 第20-21页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| ·试验材料 | 第20-21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-31页 |
| ·引入双酶切位点 | 第21-23页 |
| ·引物的设计 | 第21页 |
| ·PCR引入酶切位点 | 第21-22页 |
| ·PCR产物的回收 | 第22-23页 |
| ·表达重组质粒的构建 | 第23-25页 |
| ·ShTat1.2VSG基因的双酶切 | 第23页 |
| ·pGEX-4T-1空质粒双酶切 | 第23页 |
| ·酶切产物的纯化 | 第23页 |
| ·ShTat1.2VSG与pGEX-4T-1的连接 | 第23-24页 |
| ·重组质粒阳性克隆的PCR鉴定 | 第24页 |
| ·序列测定 | 第24-25页 |
| ·重组质粒的提取 | 第25页 |
| ·双酶切鉴定 | 第25页 |
| ·重组质粒转入宿主菌BL21 | 第25页 |
| ·SDS-PAGE电泳分析 | 第25-26页 |
| ·诱导实相表达 | 第26-27页 |
| ·蛋白表达形式分析 | 第27页 |
| ·蛋白质纯化 | 第27-29页 |
| ·特异性抗血清的制备 | 第29-30页 |
| ·Western-blot分析 | 第30-31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-35页 |
| ·伊氏锥虫ShTat1.2基因序列全长测序结果 | 第31-32页 |
| ·基因的原核表达 | 第32-33页 |
| ·在大肠杆菌中的表达与其表达产物的纯化 | 第33-34页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第34-35页 |
| ·重组蛋与伊氏锥虫抗血清的Western-blot分析 | 第35页 |
| 3 讨论 | 第35-38页 |
| ·伊氏锥虫ShTat1.2VSG基因 | 第35-36页 |
| ·外源基因在E.coli中的表达 | 第36-38页 |
| 第三章 优势变异体重组抗原ShTat1.2VSG在诊断上的应用 | 第38-51页 |
| 1 材料与方法 | 第38-42页 |
| ·试验材料和试剂 | 第38-39页 |
| ·主要仪器 | 第38-39页 |
| ·方法 | 第39-42页 |
| ·虫体复苏 | 第39页 |
| ·伊氏锥虫ShTat1.2VSG的分离和纯化 | 第39-40页 |
| ·ELISA方法和步骤 | 第40-41页 |
| ·ELISA试验最佳试验条件的摸索与确定 | 第41-42页 |
| ·抗原最佳包被浓度和最佳血清稀释度选择 | 第41页 |
| ·封闭时间的确定 | 第41页 |
| ·血清样本作用时间的确定 | 第41页 |
| ·酶标抗体工作浓度的选择和作用时间的确定 | 第41-42页 |
| ·底物显色时间的确定 | 第42页 |
| ·兔阴阳性血清阈值的确定 | 第42页 |
| ·ShTat1.2VSG可溶性抗原与重组抗原ELISA检测十二株不同地理株系兔伊氏锥虫阳性血清 | 第42页 |
| 2 结果 | 第42-48页 |
| ·可溶性抗原的浓度测定 | 第42页 |
| ·ELISA试验最佳试验条件的摸索与确定 | 第42-45页 |
| ·最佳抗原浓度和血清稀释度的选择 | 第42-43页 |
| ·最佳封闭时间的确定 | 第43页 |
| ·血清样本作用时间的确定 | 第43-44页 |
| ·HRP-IgG工作浓度和时间的确定 | 第44-45页 |
| ·底物作用时间的确定 | 第45页 |
| ·临界值判定标准的确定 | 第45-46页 |
| ·十二份不同地理株兔基因型伊氏锥虫的检测分析 | 第46-48页 |
| 3 讨论 | 第48-51页 |
| ·可溶性VSG抗原的提纯 | 第48页 |
| ·ELISA方法检测锥虫 | 第48-49页 |
| ·伊氏锥虫优势变异体重组抗原检测伊氏锥虫病 | 第49-51页 |
| 第四章 结论与创新点 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 附录A | 第57-58页 |
| 附录B | 第58-59页 |
| 附录C | 第59-60页 |
| 附录D | 第60-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 作者简历 | 第64页 |
