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烟夜蛾气味受体基因和G蛋白α亚基基因的克隆与表达

致谢第1-8页
摘要第8-10页
1 文献综述第10-23页
   ·昆虫嗅觉系统的结构与功能第10-15页
     ·昆虫周边嗅觉系统第10-14页
       ·昆虫嗅觉感受器第10-11页
       ·嗅觉相关蛋白及其功能第11-14页
     ·昆虫嗅觉中枢神经系统第14-15页
   ·昆虫气味受体研究进展第15-19页
     ·传统气味受体及其功能第15-17页
     ·Or83b 家族受体及其功能第17-18页
     ·Or83b 家族受体在昆虫体内的表达第18-19页
   ·昆虫G 蛋白研究进展第19-22页
     ·G 蛋白的亚基组成以及G 蛋白偶联信号传导系统第19-20页
     ·昆虫G 蛋白α亚基在昆虫体内的表达第20-22页
       ·G 蛋白α亚基在昆虫不同组织内的表达第20-21页
       ·G 蛋白α亚基在昆虫触角中的表达第21-22页
   ·昆虫气味受体与G 蛋白的关系第22-23页
2 引言第23-24页
3 材料与方法第24-47页
   ·供试材料第24-26页
     ·供试昆虫第24页
     ·菌种及质粒第24页
     ·主要试剂及工具酶第24页
     ·试剂盒第24页
     ·缓冲溶液第24-25页
     ·SDS-PAGE 主要试剂第25页
     ·Western blot 主要试剂第25页
     ·培养基第25-26页
     ·原位杂交主要试剂第26页
     ·免疫组化主要试剂第26页
   ·试验方法第26-47页
     ·核酸纯度和含量的测定第26页
     ·不同组织总RNA 的提取第26-27页
     ·反转录第27页
     ·烟夜蛾基因组DNA 的提取第27-28页
     ·引物和探针的设计与合成第28-31页
       ·引物的设计与合成第28页
       ·HassOr83b 基因探针的设计与合成第28-31页
     ·PCR 扩增第31-39页
       ·烟夜蛾HassOr83b cDNA 片段的扩增(内部扩增)第31页
       ·烟夜蛾HassOr83b cDNA 5′末端的扩增(5′RACE)第31-34页
       ·烟夜蛾HassOr83b cDNA 3′末端的扩增(3′RACE)第34-35页
       ·烟夜蛾HassOr83b 基因开放阅读框架(ORF)的扩增第35-36页
       ·烟夜蛾HassOr83b 基因部分内含子序列的扩增第36页
       ·烟夜蛾HassOr83b 在不同组织和发育期的表达第36-37页
       ·烟夜蛾HassGαq 基因cDNA 片段的扩增(内部扩增)第37页
       ·烟夜蛾HassGαq 基因cDNA 5′末端的扩增第37页
       ·烟夜蛾HassGαq cDNA 3′末端的扩增第37-38页
       ·烟夜蛾HassGαq ORF 的扩增第38页
       ·烟夜蛾HassGαq 在不同组织和发育期的表达第38-39页
     ·PCR 产物的琼脂糖电泳检测第39页
     ·PCR 产物的纯化第39-40页
     ·克隆载体与PCR 纯化产物的连接第40页
     ·感受态细胞的制备和质粒的转化第40-41页
       ·感受态细胞的制备第40页
       ·质粒向克隆菌株的转化第40-41页
     ·阳性克隆的筛选第41页
     ·DNA 序列测定第41页
     ·质粒DNA 提取第41-42页
     ·HassGαq 基因原核表达载体构建、转化及鉴定第42页
       ·原核表达载体的构建第42页
       ·重组表达载体的转化与鉴定第42页
     ·HassGαq 融合蛋白的原核表达第42-43页
     ·HassGαq 原核表达产物的SDS-PAGE 检测第43-44页
     ·HassGαq 原核表达产物的Western blot 分析第44页
     ·HassGαq 蛋白抗血清的制备第44页
     ·HassGαq 蛋白抗血清的效价测定和特异性检测第44-45页
       ·自制抗血清的效价测定第44-45页
       ·抗血清的特异性检测第45页
     ·雄性烟夜蛾成虫触角扫描电镜观察第45页
     ·HassOr83b 在触角表达的原位杂交分析第45-46页
     ·HassGαq 在触角表达的免疫组化分析第46-47页
4 结果与分析第47-63页
   ·烟夜蛾HassOr83b 基因完整cDNA 序列第47-48页
     ·烟夜蛾HassOr83b 基因cDNA 片段的扩增(内部扩增)、克隆和序列测定第47页
     ·烟夜蛾HassOr83b 基因cDNA 末端的扩增、克隆和序列测定第47-48页
     ·烟夜蛾HassOr83b 基因完整cDNA 序列第48页
   ·烟夜蛾HassOr83b 基因cDNA 的序列分析第48-51页
   ·烟夜蛾HassOr83b 基因部分内含子的扩增、克隆和序列分析第51-52页
   ·烟夜蛾HassOr83b 基因在不同组织和发育期的表达第52-53页
   ·雄性烟夜蛾触角感器分布第53-54页
   ·烟夜蛾HassOr83b 基因在触角内的表达第54-55页
   ·烟夜蛾HassGαq 基因cDNA 序列的扩增和序列测定第55页
   ·烟夜蛾HassGαq 基因cDNA 序列分析第55-58页
   ·HassGαq 基因在烟夜蛾不同组织和发育期的表达第58-59页
   ·烟夜蛾HassGαq 基因的原核表达第59-60页
   ·烟夜蛾HassGαq 蛋白抗血清的制备、效价分析及特异性检测第60-61页
     ·烟夜蛾HassGαq 蛋白抗血清的制备和效价分析第60页
     ·烟夜蛾HassGαq 蛋白抗血清的特异性检测第60-61页
   ·烟夜蛾HassGαq 蛋白在触角内的表达第61-63页
5 结论与讨论第63-67页
   ·结论第63-64页
   ·讨论第64-67页
参考文献第67-75页
ABSTRACT第75-77页

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