中文摘要 | 第1-5页 |
Abstract | 第5-9页 |
第一章 前言 | 第9-15页 |
·诱导多潜能干细胞 | 第9-10页 |
·转录因子及 microRNAs | 第10-12页 |
·Oct4 | 第10页 |
·Sox2 | 第10-11页 |
·Nanog | 第11页 |
·Lin28 | 第11页 |
·MicroRNAs | 第11-12页 |
·诱导多潜能干细胞的应用 | 第12-13页 |
·iPS 细胞在疾病模型上的应用 | 第12页 |
·iPS 细胞在临床上的应用前景 | 第12-13页 |
·诱导干细胞存在的问题 | 第13-15页 |
·重编程效率 | 第13页 |
·安全问题 | 第13-15页 |
第二章 携带干细胞特异性转录因子的慢病毒生产 | 第15-20页 |
·试验材料 | 第15-17页 |
·试验试剂 | 第15页 |
·主要仪器与设备 | 第15-16页 |
·主要试剂配制 | 第16-17页 |
·试验方法及步骤 | 第17-18页 |
·质粒 DNA 的少量制备与鉴定 | 第17页 |
·与慢病毒包装相关的质粒的大量抽提 | 第17-18页 |
·慢病毒的包装和生产 | 第18页 |
·慢病毒的收获 | 第18页 |
·实验结果 | 第18-19页 |
·讨论 | 第19页 |
·结论 | 第19-20页 |
第三章 人肝癌细胞系 Huh7 的培养及慢病毒的感染 | 第20-31页 |
·实验材料 | 第20-22页 |
·人肝癌细胞系 Huh7 为本实验室保有 | 第20页 |
·试验试剂 | 第20页 |
·主要仪器与设备 | 第20-21页 |
·主要试剂配制 | 第21-22页 |
·试验方法及步骤 | 第22-27页 |
·人肝癌细胞系 Huh7 的复苏与传代 | 第22页 |
·Huh7 细胞的冻存 | 第22-23页 |
·滋养层细胞的制备 | 第23-25页 |
·hESC 细胞的复苏,传代及冻存 | 第25-27页 |
·试验结果 | 第27-28页 |
·指示质粒包装出的慢病毒预感染 Huh7 细胞 | 第27-28页 |
·携带转录因子的慢病毒感染 Huh7 细胞 | 第28-29页 |
·试验试剂 | 第28页 |
·主要仪器与设备 | 第28页 |
·主要试剂配制 | 第28-29页 |
·试验方法及步骤 | 第29页 |
·病毒感染 Huh7 细胞 | 第29页 |
·试验结果 | 第29-30页 |
·携带转录因子基因的慢病毒诱导出克隆 | 第29-30页 |
·讨论 | 第30页 |
·结论 | 第30-31页 |
第四章 诱导多潜能干细胞的培养与鉴定 | 第31-41页 |
·试验材料 | 第31-32页 |
·试验试剂 | 第31-32页 |
·主要仪器与设备 | 第32页 |
·主要试剂配制 | 第32页 |
·试验方法和步骤 | 第32-37页 |
·iHuh7 细胞的传代及冻存 | 第32-33页 |
·碱性磷酸酶染色 | 第33页 |
·原位荧光免疫检测 | 第33页 |
·RT-PCR 检测克隆细胞内源多潜能基因表达 | 第33-36页 |
·体内分化畸胎瘤实验 | 第36页 |
·免疫组化实验 | 第36-37页 |
·实验结果 | 第37-39页 |
·克隆细胞 AP 染色阳性 | 第37-38页 |
·克隆细胞表达 Oct4 和 TRA-1-60 | 第38页 |
·定量 PCR 结果 | 第38-39页 |
·体内分化为畸胎瘤 | 第39页 |
·讨论 | 第39页 |
·结论 | 第39-41页 |
讨论 | 第41-43页 |
参考文献 | 第43-49页 |
文献综述:诱导干细胞的研究进展 | 第49-56页 |
参考文献 | 第53-56页 |
攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文 | 第56-57页 |
致谢 | 第57-58页 |