| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 1 前言 | 第8-17页 |
| ·Brazzein等甜味蛋白的特性及应用前景 | 第8-12页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第12-14页 |
| ·大肠杆菌中蛋白的融合表达 | 第14-15页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统 | 第15-16页 |
| ·本课题的研究内容和意义 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-32页 |
| ·材料 | 第17-21页 |
| ·菌株和质粒 | 第17-18页 |
| ·培养基 | 第18页 |
| ·试剂与试剂盒 | 第18-20页 |
| ·仪器设备 | 第20页 |
| ·PCR引物 | 第20-21页 |
| ·方法 | 第21-32页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA碱法提取 | 第21页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备与保存 | 第21-22页 |
| ·大肠杆菌化学转化 | 第22-23页 |
| ·Overlapping PCR | 第23页 |
| ·表达型质粒在大肠杆菌gami中的诱导表达 | 第23-24页 |
| ·目的蛋白分析 | 第24-25页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第25-27页 |
| ·GST融合蛋白纯化 | 第27-28页 |
| ·GST-xa融合蛋白的酶切分析及纯化 | 第28页 |
| ·解淀粉芽孢杆菌染色体DNA提取 | 第28页 |
| ·枯草芽孢杆菌感受态细胞制备及化学转化 | 第28-30页 |
| ·枯草芽孢杆菌电转化 | 第30页 |
| ·目的基因在枯草芽孢杆菌中的发酵表达 | 第30-32页 |
| 3 结果 | 第32-55页 |
| 第一部分 Brazzein在Escherichia coli中的表达 | 第32-44页 |
| ·含目的基因的表达型质粒的构建 | 第32-37页 |
| ·sw基因的合成 | 第32-33页 |
| ·pSW,pSWN的构建 | 第33-35页 |
| ·pGGlySW,pGXaSW的构建 | 第35-37页 |
| ·pHisGlySW的构建 | 第37页 |
| ·目的蛋白在E.coli中的的表达、纯化、活性分析 | 第37-44页 |
| ·pSW,pSWN的表达 | 第37-40页 |
| ·pGGlySW,pGXaSW的表达 | 第40-43页 |
| ·pHisGlySW的表达 | 第43-44页 |
| 第二部分 Brazzein在Bacillus subtilis中的表达 | 第44-55页 |
| ·含目的基因的表达型质粒的构建 | 第44-51页 |
| ·Bacillus subtilis BF7658的amyE gene及其信号肽的克隆 | 第44-45页 |
| ·bsw基因的合成 | 第45-46页 |
| ·含信号肽pSBSW质粒的构建 | 第46-49页 |
| ·bswm基因的合成 | 第49-50页 |
| ·无信号肽点突变pBSWm质粒的构建 | 第50-51页 |
| ·目的蛋白在B.subtilis WB600中的表达、纯化、活性分析 | 第51-55页 |
| ·含信号肽pSBSW的组成型表达 | 第51-52页 |
| ·无信号肽点突变pBSWm的组成型表达 | 第52-55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| 5 参考文献 | 第57-62页 |
| 6 拟发表的论文 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
