| 符号及缩略词说明 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 1 引言 | 第14-26页 |
| ·RNA 沉默现象的发现 | 第14-16页 |
| ·参与RNA 沉默的细胞组分 | 第16-17页 |
| ·RNA 沉默的机制 | 第17-18页 |
| ·RNA 沉默介导的病毒抗性 | 第18-20页 |
| ·植物中RNA 沉默的抑制 | 第20-25页 |
| ·植物编码的沉默抑制子的发现 | 第20页 |
| ·植物编码的沉默抑制子的特点 | 第20-21页 |
| ·沉默抑制子的主要研究方法 | 第21-25页 |
| ·本研究的目的意义 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-40页 |
| ·实验材料 | 第26-27页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·病毒毒源 | 第26页 |
| ·PCR 引物 | 第26页 |
| ·菌株、质粒 | 第26-27页 |
| ·抗血清 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-40页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第27-30页 |
| ·目的片段与植物表达载体的连接 | 第27-28页 |
| ·重组质粒向大肠杆菌的转化 | 第28页 |
| ·重组质粒向农杆菌转化（冻融法） | 第28-29页 |
| ·转化菌落PCR 鉴定 | 第29页 |
| ·转化菌落酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·农杆菌介导的烟草转化 | 第30-31页 |
| ·常规杂交获得双转基因植株 | 第31页 |
| ·转基因烟草的PCR 鉴定 | 第31页 |
| ·转基因烟草的ELISA 检测 | 第31-32页 |
| ·病毒接种鉴定 | 第32页 |
| ·胞间连丝的透射电镜观察 | 第32页 |
| ·WESTERN BLOT 检测 | 第32-34页 |
| ·烟草叶片总蛋白质的提取 | 第32-33页 |
| ·半干法蛋白转移 | 第33页 |
| ·免疫检测 | 第33-34页 |
| ·显色法检测蛋白质 | 第34页 |
| ·NORTHERN BLOT 检测 | 第34-38页 |
| ·植物总RNA 的提取 | 第34-35页 |
| ·在含有甲醛的凝胶上进行RNA 电泳 | 第35-36页 |
| ·转膜及烘膜 | 第36-37页 |
| ·探针的合成 | 第37-38页 |
| ·预杂交及杂交 | 第38页 |
| ·SOUTHERN BLOT 检测 | 第38-40页 |
| ·植物总DNA 的提取（SDS 法） | 第38-39页 |
| ·限制性内切酶消化 | 第39页 |
| ·转膜（DNA 碱转移） | 第39页 |
| ·探针合成 | 第39页 |
| ·预杂交及杂交 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-50页 |
| ·P25 转基因烟草的获得及鉴定 | 第40-45页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·P25 转基因植株的获得 | 第41-42页 |
| ·P25 转基因植株的PCR 鉴定 | 第42页 |
| ·P25 转基因植株的NORTHERN BLOT 分析 | 第42-43页 |
| ·P25 转基因植株的WESTERN BLOT 分析 | 第43页 |
| ·P25 转基因植株胞间连丝的透射电镜观察 | 第43-44页 |
| ·P25 转基因植株的ELISA 检测 | 第44-45页 |
| ·PVY~N CP 转基因植株后代抗病性检测 | 第45-46页 |
| ·双转基因植株的 SOUTHERN BLOT 分析 | 第46-47页 |
| ·双转基因植株的抗病性分析 | 第47-49页 |
| ·双转基因植株的 NORTHERN BLOT 分析 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-53页 |
| ·P25 对转基因烟草叶片胞间连丝孔径的影响 | 第50页 |
| ·P25 对PVY~N CP 介导的抗病性的影响 | 第50-51页 |
| ·P25 对 PVY~N CP 介导的 RNA 沉默的影响 | 第51-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-65页 |
| 附录Ⅰ 常用缓冲液及培养基的配制 | 第65-71页 |
| 附录Ⅱ 常用化学试剂、分子生物学试剂及仪器 | 第71-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 硕士研究生阶段发表的综述及论文 | 第74页 |
