| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 目录 | 第5-8页 |
| 第一章、文献综述 | 第8-20页 |
| 1 引言 | 第8页 |
| 2 芽孢杆菌抗菌防病机理的研究进展 | 第8-10页 |
| ·竞争作用 | 第8页 |
| ·诱导抗性 | 第8-9页 |
| ·拮抗作用 | 第9-10页 |
| ·抗生素类 | 第9页 |
| ·蛋白类抗菌物质 | 第9-10页 |
| 3 生防菌拮抗作用相关基因的研究进展 | 第10-11页 |
| ·拮抗基因的主要种类 | 第10-11页 |
| ·拮抗基因在抗真菌基因工程中的应用 | 第11页 |
| 4 转座子标签法研究进展 | 第11-14页 |
| ·转座原理 | 第11-12页 |
| ·转座类型 | 第12页 |
| ·转座子Tn917及其应用 | 第12-14页 |
| ·Tn917的发现 | 第12-13页 |
| ·转座子Tn917的应用 | 第13-14页 |
| 5 插入位点侧翼基因的获得方法 | 第14-18页 |
| ·反向PCR(IPCR) | 第14-15页 |
| ·随机引物PCR(RP-PCR) | 第15-18页 |
| ·半特异性PCR | 第16页 |
| ·TAIL-PCR | 第16-18页 |
| 6 本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 7 技术路线 | 第19-20页 |
| 第二章、构建Bacillus cereus抑菌活性消失突变株 | 第20-36页 |
| 1 材料与方法 | 第20-30页 |
| ·供试材料 | 第20-22页 |
| ·菌株与质粒 | 第20页 |
| ·培养基 | 第20-21页 |
| ·试剂与缓冲液 | 第21-22页 |
| ·工具酶及其他药剂 | 第22页 |
| ·仪器 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-30页 |
| ·Bacillus.subtilis PY143中质粒pTV1的提取及纯化 | 第22-23页 |
| ·质粒pTV1的酶切鉴定 | 第23页 |
| ·质粒pTV1向蜡样芽孢杆菌B-02的电转化及检测 | 第23-24页 |
| ·转座子Tn917的转座 | 第24-25页 |
| ·抑菌活性丧失突变体的筛选 | 第25页 |
| ·突变菌株的分子检测 | 第25-26页 |
| ·Southern杂交分析 | 第26-29页 |
| ·突变菌株生物学特性研究 | 第29-30页 |
| 2 结果与分析 | 第30-34页 |
| ·质粒pTV1的提取及酶切鉴定 | 第30页 |
| ·pTV1向Bacillus cereus B-02的电转化及检测 | 第30页 |
| ·转座诱变 | 第30-31页 |
| ·Southern杂交分析 | 第31页 |
| ·抑菌活性丧失突变体的筛选 | 第31-32页 |
| ·突变菌株生物学特性研究 | 第32-34页 |
| ·菌落形态的观察 | 第32页 |
| ·革兰氏染色及镜检 | 第32-33页 |
| ·突变菌株的遗传稳定性测定 | 第33页 |
| ·生长曲线测定 | 第33-34页 |
| 3 讨论与小结 | 第34-36页 |
| ·质粒pTV1向野生Bacillus cereus B-02的转化 | 第34-35页 |
| ·Tn917的转座作用 | 第35页 |
| ·抑菌活性丧失突变体的筛选及southern杂交 | 第35-36页 |
| 第三章、转座子插入位点侧翼序列的克隆 | 第36-45页 |
| 1 供试材料 | 第36-37页 |
| ·菌株与载体 | 第36页 |
| ·培养基 | 第36页 |
| ·仪器与试剂 | 第36-37页 |
| 2 实验方法 | 第37-40页 |
| ·突变菌株B-02-T基因组的提取及纯化 | 第37页 |
| ·突变菌株B-02-T的PCR检测 | 第37页 |
| ·TAIL-PCR方法克隆突变菌株B-02-T中Tn917侧翼序列 | 第37-40页 |
| ·引物设计 | 第37页 |
| ·TAIL-PCR的反应体系及程序 | 第37-39页 |
| ·PCR产物的纯化回收 | 第39页 |
| ·回收产物与载体的连接 | 第39页 |
| ·转化 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-43页 |
| ·Tn917插入突变菌株B-02-T的PCR鉴定 | 第40页 |
| ·突变菌株B-02-T Tn917侧翼序列的分离 | 第40-41页 |
| ·插入位点侧翼序列分析 | 第41-43页 |
| ·测序结果 | 第41-43页 |
| ·生物信息学分析 | 第43页 |
| 4 讨论与小结 | 第43-45页 |
| 结论 | 第45-46页 |
| 本研究创新点 | 第46-47页 |
| 展望 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 在学期间公开发表论文及著作情况 | 第53-54页 |
| 在学期间参加的学术会议及其他 | 第54页 |
