| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-22页 |
| 1.1 概述 | 第14-15页 |
| 1.2 病原学 | 第15-16页 |
| 1.3 流行病学 | 第16-17页 |
| 1.4 致病机理 | 第17-18页 |
| 1.5 临床症状及病理变化 | 第18-19页 |
| 1.6 防控措施 | 第19-20页 |
| 1.6.1 监测和净化 | 第19页 |
| 1.6.2 免疫接种 | 第19-20页 |
| 1.7 诊断方法 | 第20-21页 |
| 1.7.1 细菌学检查 | 第20页 |
| 1.7.2 血清学检查 | 第20-21页 |
| 1.7.3 变态反应检查 | 第21页 |
| 1.7.4 分子生物学技术 | 第21页 |
| 1.8 本研究的目的与意义 | 第21-22页 |
| 第二章 布鲁氏菌VirB12基因的分泌表达及鉴定 | 第22-30页 |
| 2.1 材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 布鲁氏菌菌株和血清 | 第22页 |
| 2.1.2 载体及菌株 | 第22页 |
| 2.1.3 主要药品及试剂 | 第22页 |
| 2.1.4 主要试剂配方 | 第22-23页 |
| 2.1.5 主要实验仪器 | 第23页 |
| 2.2 方法 | 第23-25页 |
| 2.2.1 引物的设计与合成 | 第23页 |
| 2.2.2 VirB12 基因的PCR扩增及回收 | 第23-24页 |
| 2.2.3 重组表达质粒的构建及鉴定 | 第24页 |
| 2.2.4 重组阳性菌的诱导表达 | 第24页 |
| 2.2.5 重组蛋白的鉴定 | 第24-25页 |
| 2.3 结果 | 第25-28页 |
| 2.3.1 VirB12基因的扩增 | 第25-26页 |
| 2.3.2 重组表达质粒鉴定 | 第26-27页 |
| 2.3.3 VirB12蛋白的诱导表达 | 第27页 |
| 2.3.4 VirB12蛋白的鉴定 | 第27-28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-29页 |
| 2.5 小结 | 第29-30页 |
| 第三章 布鲁氏菌VirB12 蛋白纯化及其抗体ELISA方法的初步建立 | 第30-43页 |
| 3.1 材料 | 第30-32页 |
| 3.1.1 临床血清样品 | 第30页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第30-31页 |
| 3.1.3 主要试剂配方 | 第31-32页 |
| 3.2 方法 | 第32-34页 |
| 3.2.1 重组阳性菌的大量诱导表达 | 第32页 |
| 3.2.2 VirB12蛋白亲和纯化 | 第32页 |
| 3.2.3 VirB12重组蛋白的离子交换纯化 | 第32页 |
| 3.2.4 VirB12 重组蛋白的离子交换纯化样品的Western-blot鉴定 | 第32-33页 |
| 3.2.5 ELISA方法的建立 | 第33-34页 |
| 3.3 结果与分析 | 第34-41页 |
| 3.3.1 诱导表达蛋白的SDS-PAGE鉴定 | 第34-35页 |
| 3.3.2 VirB12蛋白的亲和纯化 | 第35页 |
| 3.3.3 VirB12重组蛋白的离子交换纯化 | 第35页 |
| 3.3.4 纯化VirB12蛋白的鉴定 | 第35-36页 |
| 3.3.5 酶标反应板均一性的测定 | 第36-37页 |
| 3.3.6 VirB12蛋白最适包被浓度的确定 | 第37-38页 |
| 3.3.7 封闭液的选择 | 第38页 |
| 3.3.8 阴阳性血清和酶标抗体最适工作浓度的确定 | 第38-39页 |
| 3.3.9 阴阳性血清临界值的确定 | 第39-40页 |
| 3.3.10 临床样品的检测 | 第40-41页 |
| 3.4 讨论 | 第41-42页 |
| 3.5 小结 | 第42-43页 |
| 第四章 布鲁氏菌VirB12 抗原多肽的生物素-亲和素ELISA检测方法的初步建立 | 第43-56页 |
| 4.1 材料 | 第43-44页 |
| 4.1.1 临床血清样品 | 第43页 |
| 4.1.2 抗体及试剂 | 第43-44页 |
| 4.1.3 ELISA试剂和溶液 | 第44页 |
| 4.2 实验方法 | 第44-46页 |
| 4.2.1 合成抗原多肽信息表 | 第44页 |
| 4.2.2 抗原反应性初筛dot-bloting检测 | 第44页 |
| 4.2.3 ELISA方法的建立 | 第44-46页 |
| 4.3 实验结果 | 第46-54页 |
| 4.3.1 合成抗原多肽信息表 | 第46页 |
| 4.3.2 抗原反应性初筛dot-bloting检测 | 第46-47页 |
| 4.3.3 多肽的筛选 | 第47-48页 |
| 4.3.4 07B多肽最佳包被浓度的确定 | 第48-49页 |
| 4.3.5 07B多肽封闭液的选择 | 第49-50页 |
| 4.3.6 07B多肽阴性和阳性血清最佳稀释浓度的确定 | 第50-51页 |
| 4.3.7 07B多肽酶标二抗最佳稀释浓度的确定 | 第51-52页 |
| 4.3.8 阴性和阳性血清临界值的确定 | 第52-53页 |
| 4.3.9 临床样品的初步评价 | 第53-54页 |
| 4.4 讨论 | 第54页 |
| 4.5 小结 | 第54-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 攻读学位期间文章发表情况 | 第64-65页 |
