| 摘要(第一部分) | 第1-5页 |
| Abstract(第一部分) | 第5-6页 |
| 摘要(第二部分) | 第6-7页 |
| Abstract(第二部分) | 第7-12页 |
| 第一部分: 报告基因法筛选克拉维酸高产菌 | 第12-54页 |
| 1 前言 | 第12-25页 |
| ·β-内酰胺酶抑制剂-克拉维酸 | 第12-20页 |
| ·克拉维酸产生菌 | 第13页 |
| ·克拉维酸的作用机理 | 第13-14页 |
| ·克拉维酸的生物合成 | 第14-18页 |
| ·克拉维酸生物合成前体 | 第14页 |
| ·克拉维酸生物合成途径 | 第14-18页 |
| ·克拉维酸合成的基因调控 | 第18-20页 |
| ·报告基因方法 | 第20-22页 |
| ·邻苯二酚双加氧酶 | 第20-21页 |
| ·邻苯二酚2,3-双加氧酶 | 第21页 |
| ·邻苯二酚2,3-双加氧酶显色系统 | 第21-22页 |
| ·Nitrocefin | 第22-23页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第23页 |
| ·本研究的策略 | 第23-25页 |
| 2 材料和方法 | 第25-32页 |
| ·材料 | 第25-28页 |
| ·菌株和质粒 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·缓冲液及试剂 | 第26-27页 |
| ·NTG 的称量 | 第27-28页 |
| ·方法 | 第28-32页 |
| ·碱裂解法提取大肠杆菌质粒 | 第28页 |
| ·大肠杆菌质粒的快速提取 | 第28页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第28-29页 |
| ·热激转化的方法 | 第29页 |
| ·胶回收的方法 | 第29页 |
| ·链霉菌接合转移的方法 | 第29-30页 |
| ·PCR 扩增目的片段程序 | 第30页 |
| ·预萌发实验 | 第30页 |
| ·诱变处理过程 | 第30-31页 |
| ·质粒构建 | 第31-32页 |
| ·HPLC 检测方法 | 第32页 |
| 3 结果 | 第32-48页 |
| ·质粒构建结果 | 第32-35页 |
| ·pSR3的构建及酶切验证 | 第32-33页 |
| ·pEX152的构建及酶切验证 | 第33-35页 |
| ·双报告基因质粒的构建验证 | 第35页 |
| ·3585:pEX152的显色试验 | 第35页 |
| ·粗测70116:pSET152-PccaR-XN 的卡那霉素抗性上限 | 第35-36页 |
| ·NTG 诱变重组菌70116:pSET152-PccaR-XN | 第36-37页 |
| ·显色法筛选高产菌 | 第37-42页 |
| ·96孔板法初筛 | 第37-38页 |
| ·HPLC 检测克拉维酸产量 | 第38-42页 |
| ·70116与70116:pSET152-PccaR-XN 发酵比较 | 第38-39页 |
| ·HPLC 检测诱变后菌株发酵液的克拉维酸产量 | 第39-41页 |
| ·高产菌株的验证 | 第41-42页 |
| ·高通量筛选方法的建立 | 第42-46页 |
| ·滤纸片法筛选高产菌预实验 | 第42-44页 |
| ·摸索反应体系 | 第42-43页 |
| ·克拉维酸标准品的鉴定 | 第43-44页 |
| ·高通量筛选方法即96孔板法 | 第44-46页 |
| ·96孔板法的酶液初次摸索及标准曲线的测定 | 第44页 |
| ·96孔板法筛选 | 第44-45页 |
| ·样品的 HPLC 检测 | 第45-46页 |
| ·HPLC 检测得到的克拉维酸标准品的标准曲线 | 第46页 |
| ·高通量筛选方法的检测 | 第46-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 第二部分: 报告基因法比较两种放线菌启动子的活性 | 第54-72页 |
| 1 前言 | 第54-58页 |
| ·链霉菌启动子区域的普遍特征 | 第54-55页 |
| ·同典型的原核生物启动子相似的链霉菌启动子 | 第55页 |
| ·具有特定结构和功能的链霉菌启动子 | 第55-56页 |
| ·红霉素抗性基因启动子和 Psf 启动子 | 第56-57页 |
| ·报告基因 | 第57-58页 |
| ·本实验的目的及意义 | 第58页 |
| 2 材料与方法 | 第58-61页 |
| ·材料 | 第58-59页 |
| ·菌种与质粒 | 第58页 |
| ·培养基和抗生素 | 第58页 |
| ·试剂和酶 | 第58-59页 |
| ·方法 | 第59-61页 |
| ·一般操作 | 第59页 |
| ·引物设计 | 第59页 |
| ·链霉菌测量干重的方法 | 第59页 |
| ·质粒构建 | 第59-60页 |
| ·卡那霉素抗性梯度实验 | 第60-61页 |
| ·XylE 显色法方法 | 第61页 |
| 3 结果 | 第61-68页 |
| ·质粒构建结果 | 第61-66页 |
| ·PvuⅡ酶切验证 pKC-psf | 第61-62页 |
| ·EcoR Ⅰ酶切 pSR2 | 第62页 |
| ·Xba Ⅰ和 Msc Ⅰ酶切验证 pFN113 | 第62-63页 |
| ·EcoR Ⅰ酶切 pKC-psf 和 pZW121 | 第63页 |
| ·酶切验证 pZW221 | 第63-64页 |
| ·PCR 扩增 xylE 片段 | 第64页 |
| ·酶切验证 pEX152 | 第64-65页 |
| ·酶切验证 pFX113 | 第65页 |
| ·酶切验证 pFX152 | 第65-66页 |
| ·卡那霉素抗性梯度实验 | 第66-67页 |
| ·XylE 显色法比较启动子活性 | 第67-68页 |
| ·两个启动子在其他链霉菌中的比较 | 第68页 |
| 4 讨论 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
