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真核表达质粒pBK-Fas的构建及转染舌鳞癌Tca8113细胞的体外抑瘤效应

英文缩略词表第1-8页
中文摘要第8-10页
ABSTRACT第10-13页
1 前言第13-17页
2 材料与方法第17-23页
   ·主要材料和试剂第17页
   ·Fas 基因真核表达载体的构建与鉴定第17-20页
     ·PCR 引物的设计与合成第17页
     ·Fas 基因总RNA 提取及RT-PCR第17-18页
     ·Fas 基因的扩增及鉴定第18页
     ·克隆载体PMD18-T-Fas 构建及鉴定第18-19页
     ·Fas 基因真核表达载体的构建与鉴定第19-20页
   ·pBK-Fas 转染舌鳞癌 Tca8113 细胞第20页
     ·肿瘤细胞培养第20页
     ·基因转染与阳性克隆筛选第20页
   ·RT-PCR 检测 Fas mRNA 表达及半定量分析第20-21页
     ·RT-PCR 引物设计第20-21页
     ·细胞总RNA 提取第21页
     ·RT-PCR 检测Fas mRNA 表达第21页
     ·RT-PCR 产物的半定量分析第21页
   ·琼脂糖凝胶电泳对 Fas 转染细胞凋亡的检测第21页
   ·Fas 蛋白表达的流式细胞仪检测第21-22页
   ·Fas 基因的体外抑瘤效应第22-23页
     ·细胞生长曲线描记(计数法)第22页
     ·MTT 法检测细胞增殖抑制率第22-23页
     ·软琼脂集落形成实验第23页
   ·统计学处理第23页
3 结果第23-28页
   ·Fas 基因总 RNA 提取及 RT-PCR 结果分析第23页
   ·Fas 基因 cDNA 片段长度的鉴定第23-24页
   ·克隆载体 PMD18-T-Fas 重组质粒的鉴定第24页
   ·Fas 基因真核表达载体 pBK-Fas 的双酶切鉴定第24页
   ·真核表达重组质粒 pBK-Fas 的测序鉴定第24-25页
   ·Fas mRNA 的表达及 RT-PCR 产物的半定量分析第25页
   ·琼脂糖凝胶电泳检测 Fas 转染细胞凋亡第25页
   ·Fas 蛋白表达的检测第25-26页
   ·Fas 基因转染舌鳞癌 Tca8113 细胞的体外抑瘤效应第26-28页
     ·细胞生长曲线的描记第26-27页
     ·MTT 法检测细胞增殖抑制率第27-28页
     ·软琼脂细胞集落形成结果第28页
4 讨论第28-39页
   ·真核表达质粒 pBK-Fas 成功构建的意义第32-34页
     ·Fas 基因cDNA 结果分析第33页
     ·真核表达质粒pBK-Fas 构建与鉴定的分析第33-34页
   ·Fas mRNA 的表达及 RT-PCR 产物的半定量分析第34-35页
   ·DNA ladder 检测 Fas 转染细胞凋亡第35页
   ·Fas 蛋白表达的意义第35-36页
   ·Fas 基因转染舌鳞癌 Tca8113 细胞的体外抑瘤效应的分析第36-38页
     ·体外培养的Tca8113 细胞的生长活力检测第36-37页
     ·Fas 基因转染舌鳞癌Tca8113 细胞增殖抑制率的分析第37页
     ·软琼脂Tca8113 细胞克隆形成结果分析第37-38页
   ·pBK-Fas 转染舌鳞癌 Tca8113 细胞的凋亡诱导以及舌鳞癌基因治疗的展望第38-39页
5 结论第39-42页
参考文献第42-46页
附录第46-47页
致谢第47-48页
综述第48-56页
附图第56-60页

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