| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-14页 |
| 材料与方法 | 第14-29页 |
| (一) 实验材料 | 第14-16页 |
| 1. 质粒、菌株和细胞 | 第14页 |
| 2. 工具酶 | 第14页 |
| 3. 分子量标准 | 第14页 |
| 4. 试剂盒 | 第14页 |
| 5. DNA合成、测序 | 第14页 |
| 6. 抗体 | 第14-15页 |
| 7. 层析介质 | 第15页 |
| 8. 主要化学试剂 | 第15页 |
| 9. 主要仪器 | 第15页 |
| 10. 实验动物 | 第15页 |
| 11. 佐剂 | 第15-16页 |
| 12. 其他材料 | 第16页 |
| (二) 基本实验操作 | 第16-20页 |
| 1. 质粒 DNA的小量提取 | 第16页 |
| 2. 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第16-17页 |
| 3. 质粒或连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 | 第17页 |
| 4. DNA片段胶回收及无水乙醇沉淀 | 第17-18页 |
| 5. 测定蛋白浓度 | 第18页 |
| 6. Western blot免疫印迹 | 第18-19页 |
| 7. ELISE酶联免疫吸附试验 | 第19-20页 |
| (三) 引物设计、目的基因扩增及重组克隆载体的构建 | 第20-24页 |
| 1. 引物设计与合成 | 第20页 |
| 2. VP22△、mE6△/mE7基因的扩增、Linker片段的制备 | 第20-22页 |
| 3. PCR结果鉴定及产物回收 | 第22页 |
| 4. PMD18-T-VP22△-mE6△/mE7重组克隆载体的构建 | 第22页 |
| 5. 重组原核表达质粒pET28a-VP22△-mE6△/mE7的构建及鉴定 | 第22-24页 |
| (四) 重组质粒pET28a-VP22△-mE6△/mE7的诱导表达及表达条件优化 | 第24-25页 |
| 1. 诱导表达 | 第24页 |
| 2. 优势表达菌株的筛选和保存 | 第24-25页 |
| 3. pET28a-VP22△-mE6△/mE7重组质粒诱导条件的优化 | 第25页 |
| 4. 凝胶扫描测定所得到的蛋白表达量 | 第25页 |
| (五) 目的蛋白的大量表达及纯化 | 第25-26页 |
| 1. 蛋白的表达和收集 | 第25-26页 |
| 2. 蛋白的复性及纯化 | 第26页 |
| (六) VP22△-mE6△/m E7重组蛋白的WesternBlot检测 | 第26页 |
| (七) VP22-E6E7重组蛋白免疫学分析 | 第26-29页 |
| 1. 小鼠的免疫和血清特异IgG效价测定 | 第26-27页 |
| 2. 小鼠脾淋巴细胞增殖试验 | 第27-28页 |
| 3. TC-1小鼠肿瘤移植模型的建立和肿瘤治疗试验 | 第28-29页 |
| 结果与分析 | 第29-36页 |
| (一) VP22△、ml6△/mE7基因片段的亚克隆及表达载体的构建 | 第29-31页 |
| 1. VP22△、mE6△/mE7基因片段的扩增 | 第29页 |
| 2.P ET28a-VP22-E6E7表达载体的构建及鉴定 | 第29-31页 |
| (二) pET28a-Vp22-E6E7的诱导表达 | 第31-33页 |
| (三) 重组融合蛋白的大量表达、纯化及鉴定 | 第33-34页 |
| (四) 小鼠的免疫和血清特异 IgG效价测定 | 第34-35页 |
| (五) 小鼠脾淋巴细胞增殖试验 | 第35页 |
| (六) TC-1小鼠肿瘤移植模型的建立和肿瘤治疗试验 | 第35-36页 |
| 讨论 | 第36-41页 |
| 小结 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-47页 |
| 论文综述 | 第47-63页 |
| 附录 | 第63-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 作者简历 | 第71页 |
| 发表的文章 | 第71-72页 |
