| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 1 前言 | 第13-39页 |
| ·苏云金芽孢杆菌 | 第13-14页 |
| ·几丁质 | 第14-15页 |
| ·几丁质酶 | 第15-22页 |
| ·微生物来源的几丁质酶 | 第15-19页 |
| ·几丁质酶的结构域 | 第19-20页 |
| ·几丁质酶的空间结构 | 第20-22页 |
| ·微生物几丁质降解系统 | 第22-29页 |
| ·Serratia marcescens 几丁质降解系统 | 第22-26页 |
| ·Bacillus circulans WL-12 几丁质降解系统 | 第26-29页 |
| ·几丁质酶的生物活性应用 | 第29-32页 |
| ·真菌病害防治 | 第29-30页 |
| ·害虫防治 | 第30-31页 |
| ·医疗卫生 | 第31页 |
| ·几丁寡糖的生物活性 | 第31-32页 |
| ·苏云金芽孢杆菌几丁质酶 | 第32-37页 |
| ·几丁质酶的基因克隆和酶学特征 | 第33-34页 |
| ·几丁质酶对Bt 杀虫的作用 | 第34-37页 |
| ·Bt 几丁质酶的抑菌作用 | 第37页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第37-39页 |
| 2 材料和方法 | 第39-55页 |
| ·材料 | 第39页 |
| ·菌株 | 第39页 |
| ·培养基 | 第39页 |
| ·载体 | 第39页 |
| ·试剂 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-55页 |
| ·Bt 菌株的生理生化实验 | 第39-42页 |
| ·Bt 总DNA 的提取 | 第42-43页 |
| ·PCR 扩增 | 第43-44页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第44页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第44页 |
| ·克隆重组质粒的构建 | 第44-47页 |
| ·E.coli 感受态制备 | 第47页 |
| ·转化和筛选 | 第47页 |
| ·质粒提取 | 第47页 |
| ·DNA 测序 | 第47页 |
| ·生物信息学分析软件 | 第47页 |
| ·切胶回收 | 第47页 |
| ·去磷酸化处理 | 第47-48页 |
| ·表达重组质粒的构建 | 第48-51页 |
| ·目的蛋白的诱导 | 第51页 |
| ·细胞破碎 | 第51-52页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第52页 |
| ·表达蛋白的 SDS-PAGE 检测 | 第52页 |
| ·胶体几丁质的制备 | 第52页 |
| ·几丁质酶活性检测 | 第52-53页 |
| ·酶学特性分析 | 第53页 |
| ·水解产物的HPLC 分析 | 第53页 |
| ·抑菌实验 | 第53页 |
| ·线虫生测 | 第53-54页 |
| ·抗肿瘤试验 | 第54-55页 |
| 3 结果与分析 | 第55-108页 |
| ·Bt 几丁质酶基因chi74 的克隆表达和活性分析 | 第55-67页 |
| ·BRC-Bt1 菌株几丁质酶活性筛选 | 第55页 |
| ·几丁质酶基因chi74 的克隆 | 第55-56页 |
| ·生物信息学分析 | 第56-58页 |
| ·Chi74 蛋白的融合表达 | 第58-60页 |
| ·影响几丁质酶 Chi74 催化活性的因素 | 第60-63页 |
| ·酶解产物的 HPLC 分析 | 第63-67页 |
| ·Bt 几丁质酶基因chi74 的分段表达 | 第67-76页 |
| ·不同截短chi74 基因的构建 | 第67-69页 |
| ·不同截短chi74 基因的融合表达 | 第69-72页 |
| ·不同截短基因产物的活性分析 | 第72-74页 |
| ·水解产物的 HPLC 分析 | 第74-76页 |
| ·Bt 几丁质酶基因chi36 的克隆表达和活性分析 | 第76-85页 |
| ·几丁质酶基因chi36 的克隆 | 第76-77页 |
| ·生物信息学分析 | 第77-79页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第79-80页 |
| ·影响几丁质酶 Chi36 催化活性的因素 | 第80-83页 |
| ·几丁质酶 Chi36 水解产物分析 | 第83页 |
| ·Chi36 蛋白与 Chi74 蛋白混合的协同酶解分析 | 第83-85页 |
| ·Bt 几丁质酶基因chi36 的改造 | 第85-94页 |
| ·FN3 区片的克隆 | 第85-86页 |
| ·FC 区的克隆 | 第86页 |
| ·不同加长chi36 基因的构建 | 第86-88页 |
| ·不同加长chi36 基因的表达 | 第88-90页 |
| ·不同加长酶产物的活性分析 | 第90-92页 |
| ·水解产物的 HPLC 分析 | 第92-94页 |
| ·几丁质酶基因chi74 和chi36 上游调控序列的分析 | 第94-103页 |
| ·6株Bt的生理生化特性 | 第94页 |
| ·6 株Bt 菌株在LB 培养基的产几丁质酶情况 | 第94-95页 |
| ·chi74 基因上游调控序列分析 | 第95-99页 |
| ·chi36 基因上游调控序列分析 | 第99-103页 |
| ·几丁质酶的生物活性 | 第103-108页 |
| ·BRC-Bt1不同培养条件发酵液对香蕉炭疽的作用 | 第103页 |
| ·BRC-Bt1 发酵上清对稻瘟病菌的作用 | 第103-105页 |
| ·Bt 对松材线虫的生测 | 第105-106页 |
| ·Bt 几丁质酶水解产物的抑癌活性 | 第106-108页 |
| 4 讨论 | 第108-113页 |
| ·Bt 几丁质酶Chi74 的催化特性 | 第108-109页 |
| ·Chi74 不同截短酶的催化特性 | 第109页 |
| ·Bt 几丁质酶Chi36 的催化特性 | 第109-110页 |
| ·不同Chi36 加长酶的催化特性 | 第110页 |
| ·Bt 几丁质酶基因的转录调控 | 第110-111页 |
| ·Bt 几丁质酶及其酶解产物的生物活性 | 第111-113页 |
| 参考文献 | 第113-127页 |
| 附录 1 chi74 基因测序结果 | 第127-128页 |
| 附录 2 chi36 基因测序结果 | 第128-129页 |
| 附录 3 chi74 基因上游测序结果 | 第129-131页 |
| 附录 4 chi36 基因上游测序结果 | 第131-133页 |
| 附录5 博士研究生期间发表及投稿的论文 | 第133-134页 |
| 致谢 | 第134页 |
