| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-14页 |
| 一、材料与方法 | 第14-28页 |
| 1 材料 | 第14-18页 |
| ·菌种和质粒 | 第14-15页 |
| ·腺病毒载体系统 | 第14-15页 |
| ·E.coli DH5α | 第15页 |
| ·pREP4质粒 | 第15页 |
| ·酶、主要试剂和仪器 | 第15-17页 |
| ·酶和主要购买试剂 | 第15-16页 |
| ·自配试剂 | 第16-17页 |
| ·仪器 | 第17页 |
| ·细胞、培养基及培养条件 | 第17-18页 |
| ·人胚胎肾细胞293T | 第17页 |
| ·人鼻咽癌细胞CNE | 第17页 |
| ·大肠杆菌BJ5183和E.coli DH5α | 第17-18页 |
| ·人胃腺癌细胞SGC-7901 | 第18页 |
| ·抗生素与浓度 | 第18页 |
| 2 方法 | 第18-28页 |
| ·pREP4上MDA-7的鉴定以及穿梭质粒上MDA-7的搭载构建 | 第18-20页 |
| ·3S柱离心式质粒小量快速抽提法 | 第18-19页 |
| ·酶切以及质粒片段的连接 | 第19页 |
| ·电泳、胶回收 | 第19-20页 |
| ·E.coli DH5α的感受态制作、菌种保存和CaCl_2法转化 | 第20页 |
| ·PCR反应体系 | 第20页 |
| ·pAd-mda7与pAd-GFP质粒的获得 | 第20-25页 |
| ·质粒碱法抽提 | 第21-22页 |
| ·超薄琼脂糖凝胶回收 | 第22页 |
| ·电转化感受态细胞BJ5183的制备以及电转化 | 第22-23页 |
| ·穿梭质粒pAdTrackCMV与腺病毒骨架质粒AdEasy-1的同源重组 | 第23页 |
| ·重组病毒质粒的鉴定和保存 | 第23-25页 |
| ·细胞转染和病毒生产、滴度测定 | 第25-27页 |
| ·细胞复苏 | 第25页 |
| ·细胞传代培养 | 第25页 |
| ·细胞冻存 | 第25-26页 |
| ·细胞转染 | 第26页 |
| ·腺病毒的收取 | 第26页 |
| ·腺病毒滴度测定 | 第26-27页 |
| ·Hoechst33258凋亡染色和流式细胞仪检测 | 第27-28页 |
| ·Hoechst33258凋亡染色 | 第27页 |
| ·流式细胞仪PI染色检测细胞周期 | 第27-28页 |
| 二.结果 | 第28-50页 |
| 1 pREP4上MDA-7基因的鉴定 | 第28-30页 |
| ·MDA-7基因的测序结果 | 第28-30页 |
| ·pREP4上MDA-7的KpnI+XhoI双酶切鉴定结果 | 第30页 |
| 2 穿梭质粒pAdTrackCMV-mda7的构建 | 第30-31页 |
| ·pAdTrackCMV和pREP4的KpnI+XhoI双酶切结果 | 第30-31页 |
| ·pAdTrackCMV-mda7的双酶切鉴定结果 | 第31页 |
| 3 重组病毒质粒pAd-mda7和pAd-GFP的构建 | 第31-33页 |
| ·重组病毒质粒pAd-mda7和pAd-GFP的PacI酶切结果 | 第31-32页 |
| ·重组病毒质粒pAd-mda7和pAd-GFP的PCR鉴定结果 | 第32-33页 |
| 4 细胞转染和病毒滴度测定 | 第33-36页 |
| ·293T的细胞转染 | 第33-34页 |
| ·293T的二次病毒感染 | 第34页 |
| ·293T的多次病毒感染 | 第34-35页 |
| ·病毒滴度测定 | 第35-36页 |
| 5 人鼻咽癌细胞CNE相关检测结果 | 第36-44页 |
| ·CNE细胞生长形态 | 第36-40页 |
| ·CNE细胞Hoechst染色结果 | 第40页 |
| ·CNE流式细胞仪检测结果 | 第40-44页 |
| ·SubG1期检测结果 | 第40-41页 |
| ·G2/M Block期检测结果 | 第41-44页 |
| 6 人胃腺癌细胞SGC-7901相关检测结果 | 第44-50页 |
| ·SGC-7901细胞的生长形态 | 第44-48页 |
| ·SGC-7901 Hoechst染色结果 | 第48页 |
| ·SGC-7901流式细胞仪检测结果 | 第48-50页 |
| 三、讨论 | 第50-54页 |
| 1、结果分析和实验展望 | 第50-51页 |
| 2、从实验过程和结果中得到的启示 | 第51-54页 |
| 四、参考文献 | 第54-58页 |
| 五、论文发表情况 | 第58-59页 |
| 六、致谢 | 第59-61页 |
