| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 第一部分 文献综述及选题目的和意义 | 第13-23页 |
| 第一章 疱疹病毒UL28基因研究进展 | 第13-23页 |
| ·鸭瘟概况 | 第13-16页 |
| ·引言 | 第13页 |
| ·研究简史 | 第13-14页 |
| ·病原学 | 第14页 |
| ·流行病学 | 第14-15页 |
| ·临床症状与剖检病变 | 第15页 |
| ·诊断和防制 | 第15-16页 |
| ·鸭瘟病毒的分子特征概况 | 第16-18页 |
| ·鸭瘟病毒粒子的形态结构 | 第16-17页 |
| ·鸭瘟病毒的基因组特征(以α-疱疹病毒为例) | 第17页 |
| ·病毒基因的转录 | 第17-18页 |
| ·病毒的装配和释放 | 第18页 |
| ·病毒蛋白的表达 | 第18页 |
| ·UL28基因的研究概况 | 第18-21页 |
| ·UL28基因的基本特征 | 第19页 |
| ·UL28基因的功能及其编码蛋白的作用 | 第19-21页 |
| ·UL28基因的保守性 | 第21页 |
| ·选题目的和意义 | 第21-23页 |
| 第二部分 试验研究 | 第23-82页 |
| 第二章 鸭瘟病毒UL28基因分子特征及密码子偏爱性分析 | 第23-39页 |
| ·材料和方法 | 第23-24页 |
| ·基因文库和序列 | 第23页 |
| ·主要生物信息学分析工具软件 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-24页 |
| ·结果 | 第24-36页 |
| ·核苷酸序列特征分析 | 第24-26页 |
| ·氨基酸序列特征 | 第26-33页 |
| ·鸭瘟病毒UL28基因密码子偏爱性分析 | 第33-36页 |
| ·讨论 | 第36-39页 |
| ·生物信息学的简介 | 第36-37页 |
| ·UL28基因序列分析和密码子偏爱性分析的意义 | 第37-39页 |
| 第三章 鸭瘟病毒UL28基因克隆、表达及多克隆抗体的制备 | 第39-65页 |
| ·材料 | 第39-44页 |
| ·毒株/菌株/载体 | 第39-40页 |
| ·试验动物 | 第40页 |
| ·主要试剂及配制 | 第40-44页 |
| ·主要仪器设备 | 第44页 |
| ·试验方法 | 第44-53页 |
| ·PCR扩增鸭瘟病毒CHv株UL28基因 | 第44-46页 |
| ·UL28基因的T-载体克隆与鉴定 | 第46-47页 |
| ·UL28基因重组表达菌株的构建 | 第47-48页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及表达条件的优化 | 第48-50页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第50-51页 |
| ·兔抗重组蛋白IgG的制备 | 第51-53页 |
| ·结果 | 第53-59页 |
| ·斑点杂交 | 第53页 |
| ·DPV UL28基因的PCR扩增和鉴定 | 第53-54页 |
| ·UL28基因的T-克隆与鉴定 | 第54页 |
| ·重组表达质粒pET-32a/UL28的构建 | 第54-55页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及条件优化 | 第55-57页 |
| ·重组表达蛋白的纯化 | 第57页 |
| ·兔抗血清的Western-Blotting检测 | 第57-58页 |
| ·兔抗UL28血清琼扩试验效价测定 | 第58页 |
| ·兔抗UL28 IgG的纯化及SDS-PAGE鉴定 | 第58-59页 |
| ·讨论 | 第59-65页 |
| ·引物和探针的设计选择 | 第59-61页 |
| ·表达载体、宿主菌的选择和融合表达的意义 | 第61-63页 |
| ·包涵体形成和表达蛋白的分离 | 第63页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第63-65页 |
| 第四章 鸭瘟强毒UL28基因产物在宿主细胞中的表达与亚细胞定位 | 第65-73页 |
| ·材料 | 第65页 |
| ·毒株/细胞 | 第65页 |
| ·主要试剂及配制 | 第65页 |
| ·主要仪器设备 | 第65页 |
| ·试验方法 | 第65-67页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV UL28细胞定位方法的建立及优化 | 第65-67页 |
| ·DPV UL28基因产物细胞定位的动态监测 | 第67页 |
| ·结果 | 第67-71页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV UL28细胞定位方法的建立及优化 | 第67-68页 |
| ·特异性试验 | 第68-69页 |
| ·DPV UL28基因产物细胞定位的动态监测 | 第69-71页 |
| ·讨论 | 第71-73页 |
| ·蛋白定位研究的方法 | 第71页 |
| ·DPV UL28基因产物感染鸭胚成纤维细胞的定位和时相分析 | 第71-73页 |
| 第五章 荧光定量RT-PCR检测鸭瘟病毒体外感染宿主细胞UL28 mRNA的转录时相 | 第73-82页 |
| ·材料 | 第73-74页 |
| ·菌株/毒株/细胞 | 第73页 |
| ·主要试剂 | 第73页 |
| ·主要仪器设备 | 第73-74页 |
| ·其他 | 第74页 |
| ·试验方法 | 第74-77页 |
| ·鸭胚成纤维细胞的培养与病毒感染 | 第74页 |
| ·mRNA提取 | 第74-75页 |
| ·总RNA逆转录 | 第75页 |
| ·引物的设计和合成 | 第75页 |
| ·引物特异性检测 | 第75-76页 |
| ·制备标准品 | 第76页 |
| ·实时荧光定量PCR标准曲线的制作 | 第76页 |
| ·实时荧光定量PCR反应 | 第76页 |
| ·实时荧光定量PCR结果分析 | 第76-77页 |
| ·结果 | 第77-79页 |
| ·引物特异性检测 | 第77页 |
| ·UL28基因RT-PCR引物标准曲线的建立 | 第77-78页 |
| ·DPV感染DEF后UL28基因的转录时相 | 第78页 |
| ·数据统计分析 | 第78-79页 |
| ·讨论 | 第79-82页 |
| ·mRNA定量分析的方法 | 第79-81页 |
| ·UL28基因转录时相分析 | 第81-82页 |
| 第三部分 结论 | 第82-83页 |
| 第四部分 参考文献 | 第83-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 作者简介与参加课题概况 | 第90页 |
