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基因重组糖蛋白CD44s的N-糖基化研究及其被LSECtin识别机理的初步探索

摘要第1-11页
Abstract第11-16页
第一章 前言第16-32页
   ·CD44 及其糖基化研究第16-18页
     ·CD44 的功能第16页
     ·CD44 蛋白家族第16-17页
     ·CD44s 的糖基化第17-18页
   ·肝脏和淋巴结窦状上皮细胞C-型凝集素LSECtin第18-19页
   ·LSECtin 识别 CD44s 与肿瘤转移第19-20页
   ·蛋白质的糖基化修饰第20-22页
   ·糖蛋白质组学的研究策略第22-30页
     ·糖蛋白/糖肽的分离纯化与富集第22-25页
     ·糖蛋白的Top-down 分析策略第25页
     ·糖蛋白的酶切第25-26页
     ·糖链的切除第26-27页
     ·聚糖的衍生化第27页
     ·聚糖的分析方法第27-29页
     ·糖肽的分析第29-30页
     ·聚糖生物合成的生物示踪第30页
   ·本论文主要研究内容与拟解决的科学问题第30-32页
第二章 NS0 细胞系表达的标准型CD44(CD44s)的N-糖基化分析第32-62页
   ·引言第32页
   ·材料和方法第32-36页
     ·主要试剂第32-33页
     ·仪器设备第33页
     ·实验方法第33-36页
   ·结果与讨论第36-61页
     ·CD44 N-糖基化位点的确认第36-41页
     ·CD44s N-糖的泛甲基化修饰与MALDI-TOF 质谱检测第41-43页
     ·CD44s N-糖的糖苷外切酶酶切与MALDI-TOF 质谱分析第43-47页
     ·CD44s 上各N-聚糖的相对含量分析第47-52页
     ·CD44s 的糖肽分析第52-61页
   ·本章小结第61-62页
第三章 LSECtin 识别CD44s 机理的初步探索第62-75页
   ·引言第62页
   ·材料与方法第62-66页
     ·主要试剂第62-63页
     ·仪器设备第63页
     ·实验方法第63-66页
   ·结果与讨论第66-75页
     ·抗体偶联与LSECtin 结合效果的考察第66-67页
     ·LSECtin 识别CD44s 的糖基化位点及糖型的鉴定第67-70页
     ·位点突变验证实验第70页
     ·三维结构与识别位点分析第70-72页
     ·糖链转变验证实验第72-74页
     ·本章小结第74-75页
第四章 CHO 细胞系表达的CD44sN-糖基化分析第75-92页
   ·引言第75页
   ·材料和方法第75-79页
     ·主要试剂第75页
     ·仪器设备第75-76页
     ·实验方法第76-79页
   ·结果与讨论第79-90页
     ·抗体纯化条件的优化第79-80页
     ·N-糖基化位点的确认第80-84页
     ·CD44s N-糖的泛甲基化与MALDI-TOF 质谱检测第84-86页
     ·CD44s N-糖的糖苷外切酶酶切与MALDI-TOF 质谱检测第86-89页
     ·NS0 细胞与 CHO 细胞中表达的 CD44s N-糖分布的比较第89-90页
   ·本章小结第90-92页
第五章 寡糖衍生化与MALDI-TOF 质谱分析方法研究第92-102页
   ·引言第92页
   ·材料与方法第92-94页
     ·材料第92-93页
     ·溶液的配制第93页
     ·衍生化第93页
     ·MALDI-TOF 质谱分析第93页
     ·去唾液酸化胎球蛋白N-糖的制备第93页
     ·CHO 细胞中重组表达CD44s N-糖的纯化第93-94页
   ·结果与讨论第94-101页
     ·CPH 衍生化反应机理第94-95页
     ·基质的影响第95-96页
     ·衍生化反应条件的优化第96-99页
     ·对葡聚糖的分析第99页
     ·对去唾液酸化胎球蛋白的N-糖链分析第99-100页
     ·对CHO 细胞表达的CD44 的N-糖链分析第100-101页
   ·本章小结第101-102页
全文总结第102-103页
参考文献第103-117页
攻读博士学位期间发表的文章第117-118页
个人简历第118-119页
致谢第119页

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